Effekten av vitamin C på GCF total oksidantkapasitet hos røykerpasienter med periodontitt

Alle forsøkspersonene ble screenet ved omfattende periodontal undersøkelse og fullstendige periodontale diagrammer ble oppnådd og periapikale røntgenbilder av hele munnen ble tatt ved bruk av den lange kjegleparallelle teknikken på tidspunktet for den første undersøkelsen for å bekrefte diagnosen.

Begge gruppene (røykere med stadium III-IV grad B periodontitt) fikk full munnskalling og rotplaning ved bruk av ultralydskaler og håndinstrumenter under lokalbedøvelse, gjennomført over 2 besøk. Pasientene ble gitt nøye instruksjon i selvutførte plakkkontrolltiltak: to ganger daglig tannbørsting med en børste og tannpasta og én gang daglig interdental rengjøring med trekantede tretannpirkere og/eller interdentale børster som skylles med 0,125 % klorheksidin HCL munnvann (Hexitol®) brukt to ganger daglig i 2 uker. Gruppe II fikk antioksidant vit C 2 gram/dag i fire uker.

Samling av gingival crevicular fluid (GCF) prøve:

I begge gruppene ble GCF-prøver samlet ved det første besøket og samlet igjen 3 måneder etter ikke-kirurgisk behandling som følger: ved det valgte området (det mest periodontalt berørte stedet) ble all klinisk påvist supragingival plakk fjernet forsiktig for å minimere kontaminering av papirstrimler ved plaketten. Tennene som ble valgt ble deretter vasket forsiktig med vann, og stedene som ble undersøkt ble isolert med bomullsruller for å forhindre kontaminering med spytt og tørket forsiktig med en luftsprøyte. Filterpapirstrimler ble plassert ved inngangen til sprekken og ble stående på plass i 30 sekunder) og deretter plassert i plast eppendorf. Strimler med plakk, spytt eller blodforurensning ble kastet. Prøven fra det enkelte stedet ble lagret ved -80°C for senere behandling. GCF ble deretter ekstrahert og analysert for innholdet av total oksidantkapasitet.

Kvantifisering av TOC i GCF:

GCF-prøver fra begge grupper ble analysert ved bruk av ELISA-teknikk for å estimere nivået av total oksidantkapasitet (TOC) i GCF som følger:

TOC ble ekstrahert fra papirstrimmelen ved å tilsette 100 μl fosfatbuffer saltvann til eppendorf-røret og deretter blandet med vortex etterfulgt av sentrifugering i 10 minutter ved 3000Xg. Supernatanten ble brukt for estimering av TOC. For kvantitativ bestemmelse av humane TOC-konsentrasjoner i GCF, ble PerOx (TOS/TOC) Immun-diagnostik Assay (ELISA) Kit brukt. ELISA er beregnet på kvantitativ bestemmelse av total oksidativ status/kapasitet (TOS/TOC) i etylen-diamintetraeddiksyre (EDTA)-plasma, serum og cellekultursupernatanter.

Bestemmelsen av peroksidene utføres ved omsetning av en peroksidase med peroksider i prøven etterfulgt av konvertering av TMB (Tetra-metylbenzidin) til et farget produkt. Etter tilsetning av en stoppløsning ble prøvene målt ved 450 nm i en mikrotiterplateleser. Kvantifiseringen utføres av den leverte kalibratoren