Wirksamkeit der Malariabehandlung in Mexiko (EMTM)

Malaria befindet sich in Mexiko im Präeliminierungsstatus (Rodriguez et al., 2011; WHO, 2012), die lokale Übertragung von Plasmodium falciparum wurde seit 2000 unterbrochen und die Übertragung von P. vivax, dem einzigen Erreger des Landes, reduziert sehr wenige Krisenherde (Gesundheitsministerium – Mexiko, 1995-2005, Panamerikanische Gesundheitsorganisation (PAHO), 2008, WHO, 2012).

Cloroquine (CQ) und Primaquine (PQ) werden seit 1940 zur Behandlung von Blut- und Leberinfektionen mit P. vivax in den am stärksten betroffenen Gebieten weltweit eingesetzt (Coatney, 1963). Seit Ende der 80er Jahre wurde jedoch zunehmend über P. vivax-Resistenz gegen CQ in verschiedenen geografischen Regionen berichtet (Baird 1995). Chloroquin, nicht mehr als Monotherapie empfohlen, WHO, 2010), verabreicht (25 mg/kg Körpergewicht) an drei aufeinanderfolgenden Tagen (10, 10 und 5 mg/kg Körpergewicht) in Kombination mit PQ (0,25–0,75 mg/ kg Körpergewicht) während 14 Tagen, wird in Regionen, in denen Parasiten anfällig sind, noch verwendet (White, 1998; WHO, 2010). Das 14-tägige Regime heilt effektiv primäre Blutinfektionen und verhindert Rückfälle bei mindestens 90 % der Patienten (Galappaththy et al., 2007).

In Mexiko wird CQ in Kombination mit PQ seit den 50er Jahren des vergangenen Jahrhunderts als Standardbehandlung für P. vivax-Malaria verwendet. Aufgrund unerwünschter Nebenwirkungen wie Magenverstimmung wird die PQ-Behandlung jedoch häufig nicht abgeschlossen. An schwer zugänglichen Orten können die verlängerten Intervalle zwischen Blutentnahme, parasitologischer Diagnose und Behandlung der Patienten bis zu 3-4 Wochen dauern. Um das Übertragungsrisiko zu verringern, wurde daher fieberhaften Patienten in abgelegenen Gebieten Blut entnommen und sofort mit einer Einzeldosis von 10 mg CQ und 0,75 mg PQ/kg Körpergewicht und nur nach mikroskopischer Bestätigung mit einem intermittierenden Einzeldosisschema behandelt ( ISD) verabreicht wurde (Mendez et al., 1994; Channon et al., 2003; NOM-032-SSA2-2002).

Das erste einzelne kombinierte CQ-PQ wird immer noch verabreicht und es wird erwartet, dass es Blutparasiten eliminiert, da PQ Parasiten zerstören kann, die durch die Wirkung von CQ überleben [Murphy et al., 1991), und die wiederholte Verabreichung von ISD sollte das Wiederauftreten von Parasitämien unterdrücken (Mendez et al., 1994). Ihre Wirksamkeit wurde jedoch nicht evaluiert.

Die Bewertung und Überwachung der Wirksamkeit der implementierten Behandlungsstrategien sind notwendig, um die Eliminierung der Malaria in der Region voranzutreiben (malERA, 2011).

Methodik Diese Studie wurde vom Ethical Review Committee des National Institute of Public Health (INSP), Mexiko, genehmigt. Die Einwilligung nach Aufklärung wurde von allen Patienten und den Erziehungsberechtigten von Patienten unter 18 Jahren eingeholt.

Die Studie folgte dem In-vivo-Testprotokoll der Weltgesundheitsorganisation (WHO) zur Überwachung der Resistenz gegen Malariamedikamente. Da nach 17 Tagen nach der primären Blutinfektion frühe Schübe auftreten können, wurden die Patienten für die Abheilung der primären Blutinfektion für ≈ Tag 28 und von einem Monat bis zu 12 Monaten nachbeobachtet, um die Eliminierung von Schüben zu überwachen. Bei Bedarf wurde ein flexibler Zeitplan eingeführt, um die Nachsorge der Patienten zu erleichtern und Patientenverluste zu minimieren, wie von anderen vorgeschlagen (Ruebush et al., 2003).

Studienort. Die Studie wurde in der Gemeinde Tapachula und umliegenden Gemeinden im Süden von Chiapas, Mexiko, an der Grenze zu Guatemala durchgeführt. Die Patientenrekrutierung wurde in der Diagnoseeinrichtung des Regionalzentrums für öffentliche Gesundheitsforschung-INSP (CRISP) in der Stadt Tapachula durchgeführt, wo fiebrige Menschen, die eine Malariadiagnose und -behandlung suchen, kostenlose Dienste erhalten.

Stichprobengröße. Es wurde eine Mindeststichprobengröße von Teilnehmern pro Gruppe erwartet, wie von der Weltgesundheitsorganisation für klinische Studien in Amerika angegeben ((WHO, 2009; PAHO, 2010). Die Gesamtzahl der Patienten, die während des Studienzeitraums aufgenommen wurden, wurde jedoch durch die Anzahl der Fälle bestimmt, bei denen P. vivax diagnostiziert wurde, die die Einschlusskriterien erfüllen und zur Teilnahme akzeptiert wurden.

Patientenaufnahme. Ein symptomatischer Patient wurde als eine Person definiert, die Fieber oder zwei andere Malariasymptome aufwies. Die Patienten wurden von Februar 2008 bis Oktober 2009 gemäß den Einschluss- und Ausschlusskriterien rekrutiert (siehe Eignungskriterien). Eingeschriebene Patienten wurden randomisiert, um entweder kombinierte CQ- und PQ-Medikamente in ISD- oder T14-Schemata zu erhalten, aber Patienten, die in Tapachula City und in der Nähe lebten, wurde es vorgezogen, T14 zu erhalten, um die tägliche Behandlungsüberwachung zu erleichtern. Am selben Tag der Diagnose und vor der Verabreichung der Behandlung (Tag 0; Datum vermerkt) wurden die Patienten auf axiale Temperatur in Grad Celsius (°C), Körpergewicht (in kg), Milzschwellung und das Vorhandensein klinischer Symptome innerhalb der letzten 48 untersucht h wie Fieber, Kopfschmerzen, Myalgie und Arthralgie. Erythem und Gelbsuchtzeichen wurden am Tag der Aufnahme festgestellt. Für die parasitologische und molekulare Analyse wurde Kapillarblut durch Einstechen in den Finger gesammelt, um dünne und dicke Abstriche herzustellen und Filterpapiere (Whatman #2) zu imprägnieren. Andere demografische Daten wurden mithilfe eines Fragebogens erhoben, z. Alter, Geschlecht, frühere Einnahme von Chloroquin und Primaquin und Malariainfektionen usw.

Patientenbehandlung und Nachsorge. Die empfohlene Dosis für eine Einzeldosis bestand aus 10 mg/kg CQ-Phosphat und 0,75 mg/kg Primaquin. Patienten unter ISD sollten an den Tagen 0, 30, 60, 180, 210 und 240 eine Einzeldosis einnehmen. Andererseits umfasste die optimale Dosis von T14 25 mg/kg CQ, verabreicht über einen Zeitraum von 3 Tagen (10 mg/kg an den Tagen 0 und 1 und 5 mg/kg an Tag 2) und PQ von 0,25 mg/kg /Tag während 14 Tagen (WHO, 2010). Beide Behandlungsschemata wurden jedoch gemäß der von den mexikanischen offiziellen Richtlinien (NOM-032-SSA2-2002) vorgeschriebenen Operationstabelle an das Alter der Patienten angepasst. Alle Behandlungsdosen wurden unter Aufsicht eines Mitglieds des Studienteams verabreicht. Für kleine Kinder wurden Tabletten zerkleinert, mit Wasser vermischt und mit dem Löffel gefüttert. Behandelte Patienten wurden während 30 Minuten nach der Einnahme der Arzneimittel beobachtet. Diejenigen, die die erste Dosis erbrachen, wurden mit einer ähnlichen Dosis erneut behandelt, aber diejenigen, die erneut erbrachen, wurden von der Studie ausgeschlossen.

Der erste Teil der Studie war darauf ausgelegt, das parasitologische (primäre Blutinfektionsheilung) und klinische Ansprechen auf beide Behandlungsschemata zu überwachen. Behandelte Patienten wurden an den Tagen 2, 3, 7, 14, 21 und 28 zur Untersuchung angesetzt. Der zweite Teil der Studie war darauf ausgelegt, das Auftreten von Rückfällen durch monatliche parasitologische und klinische Untersuchungen über einen Zeitraum von bis zu 12 Monaten zu überwachen.

Die Patienten wurden ermutigt, in unsere Einrichtungen zurückzukehren oder uns bei Bedarf per Mobiltelefon zu kontaktieren (die meisten Patienten oder ihre Eltern hatten ein Mobiltelefon), wenn sie sich zu irgendeinem Zeitpunkt während der Nachbeobachtungszeit krank fühlten oder Fragen dazu hatten lernen. Teilnehmer, die nicht in unsere Einrichtungen zurückkehren konnten, wurden zu Hause besucht, um eine Behandlung, klinische Überprüfung und Blutentnahme durchzuführen. Ein diagnostischer Schnelltest (RDT) (OptiMAL©) wurde bei symptomatischen Patienten zu Hause angewendet. Die dicken Abstriche von symptomatischen Patienten mit negativem RDT wurden am selben Tag analysiert und im Falle der Bestätigung einer rezidivierenden P. vivax-Episode wurden die Patienten sofort mit T14 behandelt.

Bei Bedarf wurde ein flexibler Zeitplan implementiert, um die Nachsorge der Patienten zu erleichtern, z. Wenn Patienten nach der ersten SD-Behandlung an Tag 3 nicht zu Hause waren, wurden sie an Tag 4, Tag 7 ± 1 und Tag 14 ± 2 besucht, und für alle Patienten (unter ISD oder T14) an Tag 21 ± 2 und so weiter . Zwei dicke und dünne Blutausstriche und eine in Filterpapier (Whatman Nr. 2) imprägnierte Blutprobe wurden bei jedem planmäßigen oder zusätzlichen Besuch (bei symptomatischen Patienten) hergestellt. Patienten mit Achseltemperaturen ≥37,5 °C wurden symptomatisch mit Paracetamol (10 mg/kg) behandelt.

(siehe Ergebnismaße)

Parasitologische Diagnose. Dicke und dünne Blutausstriche wurden fünf Minuten lang mit einer 10%igen Giemsa-Farbstofflösung gefärbt. Die dicken Ausstriche wurden unter einem Lichtmikroskop mit Ölimmersion 100 × von erfahrenen Mikroskopikern untersucht. Die asexuellen und sexuellen Parasitendichten wurden bestimmt, indem die Anzahl der Parasiten gegen 200 weiße Blutkörperchen (WBC) (oder 500 WBC, wenn weniger als 10 Parasiten in 200 WBC-Feldern angetroffen wurden) gezählt wurden, wobei von 7.000 WBC/μl Blut ausgegangen wurde (Gonzalez-Ceron et al., 2005).

Anti-P. vivax blood stuft IgG-Antikörper durch ELISA ein. Wiederkehrende Blutinfektionen mit P. vivax aufzudecken; asymptomatisch und/oder mit geringer Parasitämie, die mikroskopisch nicht nachgewiesen wurde, wurden Immunglobuline vom Isotyp G (IgG) gegen native P. vivax-Blutstadiumproteine ​​in allen Proben gemessen, die von Monat 1 bis 12 erhalten wurden. Von jedem Patienten wurden in Filterpapier konservierte Blutproben eluiert in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) und in einem ELISA getestet, um IgG-Antikörper gegen P. vivax-Blutstadien nachzuweisen (Gonzalez-Ceron et al., 1991). Serokonversion oder Veränderungen der Antikörpertiter wurden analysiert. Ein Cutoff-Wert von 0,25 des Extinktionswerts wurde zuvor bestimmt.

Molekulare Diagnose . Die Molekulardiagnostik hat sich in verschiedenen von Malaria betroffenen Regionen als sehr empfindlich erwiesen (Rubio et al., 1999). Alle Follow-up-Blutproben der Tage 2, 3, 7, 14, ~21 und ~28 sowie die Proben, die während der 12-monatigen Nachuntersuchung mit Verdacht auf eine kürzlich erfolgte Malariainfektion entnommen wurden, was durch einen Anstieg der Antikörper-Anti-P. vivax IgG (mittels ELISA), wurden einer molekularen Diagnose unterzogen. Sechs Löcher von 5 mm getrocknetem Blut in Filterpapier wurden geschnitten und verwendet, um DNA unter Verwendung des QIAamp® DNA Blood Mini Kit (QIAGEN, Deutschland) gemäß den Anweisungen des Herstellers zu extrahieren. Die DNA wurde in 50 ul Wasser suspendiert. Zum Nachweis des Gens der ribosomalen 18S-Untereinheit der P. vivax-RNA (18ssrRNA).

Genotypisierung primärer und rezidivierender Infektionen mit P. vivax (Gonzalez-Ceron et al., 2013). Um P. vivax-Genotypen von primären und sekundären Episoden zu vergleichen, wurde Polymerase-Kettenreaktions-Restriktions-Fragmentlängen-Polymorphismus (PCR-RFLP) verwendet, um cspr-, msp3α- und msp3β-Genmarker zu analysieren. Die Homogenität der P. vivax-Genotypen zwischen den Gruppen wurde durch einen exakten Fisher-Test (α = 0,05) untersucht.

Datenanalyse Alle parasitologischen und klinischen Daten von jedem Patienten, der die überwachten Behandlungen (für 28 Tage und für 12 Monate) abgeschlossen hat, wurden mit STATA v12 analysiert. Um die Möglichkeit auszuschließen, dass eine Unterdosis eine Verzögerung der Parasitenbeseitigung verursachte, wurden die am Tag 0 aufgezeichneten Körpergewichte verwendet, um die den Patienten verabreichten CQ- und PQ-Dosen zu berechnen und mit den für ihr Körpergewicht erforderlichen verglichen.

Parasitologische und klinische Heilung der primären Blutinfektion:

Klassifizierung der Behandlungsergebnisse gemäß den Methoden zur Überwachung der Wirksamkeit von Malariamedikamenten (WHO, 2009)

Frühzeitiges Therapieversagen (ETF)

• Gefahrenzeichen oder schwere Malaria an Tag 1, 2 oder 3 bei Vorliegen einer Parasitämie;
• Parasitämie am 2. Tag höher als am 0. Tag, unabhängig von der Axillartemperatur;
• Parasitämie an Tag 3 mit Achseltemperatur ≥ 37,5 ºC;
• Parasitämie an Tag 3 ≥ 25 % der Zählung an Tag 0. Spätes Behandlungsversagen (LTF)
• Gefahrenzeichen oder schwere Malaria bei Vorliegen einer Parasitämie an einem beliebigen Tag zwischen Tag 4 und Tag 28 bei Patienten, die zuvor keines der Kriterien für ein frühes Therapieversagen erfüllten;
• Vorliegen einer Parasitämie an einem beliebigen Tag zwischen Tag 4 und Tag 28 mit axillärer Temperatur ≥ 37,5 °C (oder Fieber in der Anamnese) bei Patienten, die zuvor keines der Kriterien für ein frühes Therapieversagen erfüllten.

Angemessenes klinisches und parasitologisches Ansprechen (ACR)

- Fehlen von Parasitämie innerhalb der Tage 7-28 ohne TF-Signal. Für die ACR-Analyse wurden mikroskopische parasitologische Ergebnisse mit und ohne PCR-Anpassung eingeschlossen.

Der exakte Fisher-Test wurde verwendet, um zwei oder mehr unabhängige Proportionen zu vergleichen: Geschlecht, Vorhandensein von Symptomen, Verteilung des P. vivax-Genotyps, PCR-Positivität und Parasitenpersistenz an den Tagen 2 und 3 zwischen den Behandlungsgruppen. Der Wilcoxon-Rangsummentest wurde für nicht-parametrische Vergleiche verwendet: Alter, asexuelle und sexuelle Parasitämie, Medikamentendosen, Tage der Symptome und axiale Temperatur. Alle Signifikanztests waren zweiseitig und P-Werte < 0,05 wurden als statistisch signifikant betrachtet.

Rezidivierende Blutinfektionen, die während der 12-monatigen Nachbeobachtung festgestellt wurden, wurden ebenso registriert wie die Patienten, die in den Ruhestand gingen. Die Wirksamkeit wurde als Prozentsatz der kumulierten Anzahl von Patienten ohne P. vivax-Blutinfektion (erster rezidivierender Fall), die in jedem Monat der Probenentnahme festgestellt wurden, dividiert durch die Gesamtzahl der nachbeobachteten Patienten berechnet. Der Z-Test wurde verwendet, um Unterschiede im Anteil von Patienten oder Proben mit einer rezidivierenden Infektion zu bestimmen. Um die kumulative Inzidenz von Patienten mit erstem Rezidiv in Prozent darzustellen, wurden die Kaplan-Meier-Ausfallschätzungen verwendet.

Um das klinische und parasitologische Ergebnis bei primärer Blutinfektion zu bewerten, wurden Proben für die Tage 2, 3, 7, 14, 21 und 28 in einem flexiblen Zeitplan entnommen und bei wiederkehrenden Blutinfektionen wurden weiterhin jeden Monat bis zu 12 Monate Proben entnommen. Blutproben von Tag 2 bis Tag 28 wurden durch Mikroskopie des dicken Ausstrichs und durch molekulare Diagnose analysiert. Proben von Patienten mit Symptomen wurden sofort analysiert und wenn eine rezidivierende Infektion festgestellt wurde, wurden die Patienten durch die 14-tägige Behandlung gerettet. Um asymptomatische Infektionen aufzudecken, wurden alle anderen Proben innerhalb von 1-12 Monaten mikroskopisch analysiert und Antikörper-IgG-Titer getestet, und nur diejenigen, bei denen eine wiederkehrende Blutinfektion vermutet wurde, wurden molekulardiagnostisch untersucht.

In die Analyse wurden nur Daten von Patienten einbezogen, die die Supervising-Behandlungen abgeschlossen hatten. Parasitologische und klinische Heilung der primären Blutinfektion: Die Analyse des Ansprechens auf die Behandlung berücksichtigte zwei Ergebnisse, basierend auf 1) dem frühen klinischen und parasitologischen Ergebnis, das nach 2-3 Tagen nach der Behandlung bewertet wurde, 2) und therapeutischem Versagen (TF), falls klinisch und/oder parasitologische asexuelle Parasitenpersistenz oder Wiederauftreten trat innerhalb von 7–28 Tagen auf. Ein adäquates klinisches und parasitologisches Ansprechen (ACPR) wurde definiert als (1) Abwesenheit von Parasitämie innerhalb der Tage 7–28 ohne jegliches TF-Signal. Für die ACR-Analyse wurden mikroskopische parasitologische Ergebnisse mit und ohne PCR-Anpassung eingeschlossen. Die Wirksamkeit zur Eliminierung von Rückfällen wurde durch die monatliche Nachbeobachtung bis zu einem Jahr nachgewiesen, indem das Vorhandensein von Symptomen und/oder des Parasiten im Blutkreislauf und der P. vivax-Genotypabgleich von primären und wiederkehrenden Infektionen festgestellt wurden.

Klassifizierung der Behandlungsergebnisse bei wiederkehrenden Blutinfektionen, die nach 28 Tagen und bis zu 12 Monaten festgestellt wurden:

Wiederkehrende Blutinfektion. Das Wiederauftreten einer symptomatischen oder asymptomatischen asexuellen Parasitämie nach oder während der Verabreichung der Behandlung kann durch einen Rückfall oder eine neue Infektion hervorgerufen werden. Ein Rückfall wird durch einen Hypnozoiten verursacht, Ruhestadium in der Leber, der bei s Anteil der Patienten nach einer primären Blutinfektion vorhanden ist.

Geschlecht und Alter von Patienten mit rezidivierenden Blutinfektionen werden angegeben, ebenso der Zeitpunkt, Parasitämie, serologische Veränderungen, Parasiten-Genotyp, Vorhandensein oder Fehlen von Symptomen. Der Anteil wiederkehrender Episoden, die zum Genotyp passten oder nicht, wurde für beide Behandlungsschemata verglichen und die statistische Signifikanz berechnet (p-Wert).

ÜBERWACHUNG, FORMATE UND VERFAHREN ZUR VERMEIDUNG FEHLERHAFTER DATEN:

Patientenregister: Alle Dokumente über einen Patienten enthielten seinen Namen, sein Dorf (und seine Hausnummer/Adresse) und den eindeutigen Code. Der PI überwachte regelmäßig die Verfahren zur Diagnose und Patientenrekrutierung sowie die Nachsorge im Labor und im Feld. Die Registrierungsverfahren und Informationsblätter pro Patient werden in individuellen Akten vom PI geführt:

• Formular 1: Patient, bei dem P. vivax diagnostiziert wurde: Patientenname, Alter, Geschlecht, vor der Diagnose eingenommene Medikamente, Patientenadresse, lebende, asexuelle und sexuelle Parasitämie pro µl Blut. Name des Tutors, falls es sich um einen unter 18-jährigen Patienten handelt.
• Formular 2: Einverständniserklärung: Ein Patient hat die Einschlusskriterien erfüllt, er wurde gebeten, anhand der Einverständniserklärung der Studie teilzunehmen, die von der Ethikkommission des Nationalen Instituts für öffentliche Gesundheit in Mexiko genehmigt wurde.
• Formular 3: Ein Krankenblatt wurde ausgefüllt mit dem Patientennamen und eindeutigem Code, klinischen Daten des symptomatischen Patienten wie Vorhandensein von Fieber (innerhalb von 48 h), Kopfschmerzen, Myalgien, Arthralgien, Symptomen, die auf Paroxysmus hindeuten, klinische Revision für die Suche von Erythem, Gelbsucht und Patientengewicht wurden gesammelt.
• Formular 4: Follow-up-Blatt wurde ebenfalls implementiert, um bei allen Besuchen (geplant und außerplanmäßig) das Datum der Patientenbefragung, die klinischen Symptome und die Blutprobenentnahme zu registrieren. Im Falle der Abwesenheit des Patienten zu Hause wurde dies im Formular vermerkt und der Besuch auf den nächsten Tag verschoben (im Falle einer Nachsorge innerhalb von 28 Tagen, könnte aber innerhalb einer Woche verschoben werden, oder für eine monatliche Nachsorge (innerhalb von Monat eins bis Monat 12).
• Eine Excel-Datenblatt-Datenbank wurde regelmäßig aktualisiert (jeden Monat) und mit dem Labor, dem Feldteam und dem PI doppelt überprüft, um Informationsverluste und Ungenauigkeiten zu vermeiden.

• Die Objektträger und andere Proben wurden in ein Papier eingewickelt mit dem eindeutigen Patientencode und dem Entnahmedatum an das Labor geliefert. Jeden Wochentag gab es einen Empfang durch denselben Labortechniker, um alle Probencodes und Daten mit Formaten pro Patient zu überprüfen. Da die Informationen ständig überarbeitet wurden, wurden alle Widersprüchlichkeiten durch Proben sowohl im Labor als auch im Feldteam behoben. Jeweils einer von zwei Objektträgern mit dickem und dünnem Abstrich pro Patient wurden präpariert und regelmäßig an das Malarialabor des National Institute for Diagnosis and Epidemiological Reference-Mexico (regelmäßig monatlich) geschickt, sie wurden sowohl vom PI als auch persönlich übergeben Die Erfassung der Ergebnisse und alle Anfragen zum Code der Probe und zu den Ergebnissen wurden überarbeitet und gelöst. Am Ende der Studie wurden alle Proben vom PI gesammelt und bei Unstimmigkeiten Proben zwischen Mikroskopikern der beiden Institutionen gekreuzt, diese Verfahren wurden vom PI koordiniert.

  • Eine Kopie des Nachsorgeformulars wurde beim Patienten zu Hause aufbewahrt. Datenprüfungen, Überprüfung der Quelldaten zur Beurteilung der Genauigkeit: Standardarbeitsanweisungen für Registeroperationen und Analyseaktivitäten, wie z. B. Patientenrekrutierung, Datenerfassung, Datenverwaltung, Datenanalyse, Meldung unerwünschter Ereignisse usw.

Das an diesem Projekt beteiligte Personal hatte spezifische Aufgaben, und der PI überwachte regelmäßig alle verschiedenen Aktivitäten des Labor- und Feldpersonals der Studie. Für jeden rekrutierten Patienten wurden ein Nachverfolgungsplan und Besuchstermine programmiert (jedem Patienten wurde eine Kopie zur Verfügung gestellt), und wenn möglich, war das Mobiltelefon des Patienten oder Elternteils nützlich, um ein oder zwei Tage vor dem nächsten Besuchstermin zu warnen.

Feldteam: bestehend aus zwei Personen, einem Kliniker und einem Biologen. Probenaufnahme im Labor: wurde während der gesamten Studie von demselben Techniker durchgeführt, Trennen der Objektträger vom Filterpapier und Liefern und/oder Aufbewahren der Proben.

Mikroskopiker: Hochqualifiziertes, erfahrenes Personal, von dem einer Proben von symptomatischen Patienten vor der Einstellung überprüft. Ein anderer Mikroskopiker untersuchte die Objektträger aus der Studie und priorisierte die Proben von Patienten, die nachuntersucht wurden und klinisch verdächtig waren. Nach der Untersuchung wurden die Objektträger vom Laborleiter konzentriert und vom PI aufbewahrt.

Zum Nachweis einer Wirkung erforderliche Stichprobengröße: Die Empfehlungen der WHO zur Bewertung der Malariabehandlung in Amerika wurden befolgt, jedoch begrenzt durch die Anzahl der Patienten mit Einschlusskriterien, die einer Teilnahme während des 2-Jahres-Zeitraums zugestimmt haben. Das Projekt wurde zudem auf neun Monate verlängert.

Daten oder Proben mit unklaren Informationen wurden verworfen. Sie wurden nicht in die Analyse einbezogen, um zu vermeiden, dass Patienten verloren gehen, wurde vor Ort ein flexibler Zeitplan für vermisste Patienten eingeführt. Patientenpensionierung (umfasst freiwillige oder unfreiwillige Pensionierung oder Protokollverletzung). Der Patient selbst oder der Betreuer des Patienten kann jederzeit aus der Studie ausscheiden, oder der PI scheidet den Patienten aus, wenn;

1. Vorhandensein einer Begleiterkrankung
2. Nachweis einer Plasmodium-Mischinfektion
3. Verabreichung anderer Antimalariamittel oder zusätzliche Behandlungsdosen während der Nachsorge
4. Der Patient möchte nicht fortfahren
5. Schwanger werden
6. Unvollständige Überwachungsbehandlung erhalten
7. Andere Nebenwirkungen: schwere Allergien, Vorhandensein einer anderen Krankheit durch einen Infektionserreger
8. Verwandeln Sie sich in eine schwere Malaria
9. Rettungsbehandlung erhalten