Biomarcadores en muestras de tejido de pacientes con sarcoma de Ewing

OBJETIVOS:

• Describir el espectro de polimorfismos de microsatélites GGAA en loci específicos en el ADN genómico preparado a partir de muestras de tumores de sarcoma de Ewing.
• Determinar si existen diferencias en los polimorfismos de microsatélites GGAA en el ADN genómico preparado a partir de muestras de tumores de sarcoma de Ewing en comparación con el ADN genómico normal europeo y africano no afectado.
• Determinar si los polimorfismos de microsatélites GGAA en loci específicos en el ADN genómico preparado a partir de muestras de tumores de sarcoma de Ewing se correlacionan con el resultado de la enfermedad en pacientes tratados con el protocolo AEWS0031 del COG.
• Determinar si la amplificación del genoma completo introduce alteraciones en los microsatélites GGAA en comparación con el ADN genómico no amplificado.

ESQUEMA: La PCR genómica se utiliza para amplificar los microsatélites en los promotores NR0B1 y GSTM4. Además de determinar el tamaño de los microsatélites, cada microsatélite se secuencia después de la clonación en el vector pCR4 (Invitrogen) utilizando protocolos de clonación de topoisomerasa estándar.