Profil immunologiczny raka otrzewnej

1. TŁO:

   Interakcja guz-gospodarz obejmuje inaktywację immunologicznego rozpoznawania komórek złośliwych przez mechanizm, który nie jest jeszcze w pełni poznany. Badania aneuplodycji na komórkach z różnych miejsc przerzutów wykazują zwiększoną heterogeniczność w zależności od miejsca przerzutu (Kimball 1997). Sugeruje to, że fenotypowo różne populacje komórek są odpowiedzialne za różne przerzuty i mogą wykazywać różną wrażliwość/oporność na leczenie. Kitayama (2015) badał stosunek limfocytów do komórek nabłonkowych w jamie otrzewnej, ale stosował ten stosunek jedynie jako wskaźnik obciążenia nowotworem i nie odnosił go do wyników okołooperacyjnych.

   Badacze zaobserwowali klinicznie odmienne zachowanie przerzutów do otrzewnej w porównaniu z tymi zlokalizowanymi w innych miejscach ciała (Franko 2012, Klaver 2012, Franko 2016). Wysunięto hipotezę, że interakcja guz-gospodarz i odpowiedź gospodarza na leczenie są związane z chorobowością związaną z leczeniem, wczesnym lub opóźnionym nawrotem i całkowitym przeżyciem.

   Istnieje ograniczona literatura i badania badające profil immunologiczny chemioterapii dootrzewnowej i jej związek z chorobowością i przyszłymi miejscami przerzutów. Dlatego konieczna jest dalsza wiedza na temat biologii różnych przerzutów do powierzchni otrzewnej. To, wraz z dodatkowymi badaniami, może prowadzić do konkretnych terapii.

2. CELE:

   Określenie profilu immunologicznego jamy otrzewnej i jego związku z natychmiastowym wynikiem pooperacyjnym (zachorowalność lub leczenie) i odległym (czas do wznowy i przeżycia).

3. BADANA POPULACJA:

   Pacjenci z rakiem otrzewnej poddawani chemioterapii dootrzewnowej.

   3.1 Kryteria wykluczenia: Poniżej 18 roku życia, pacjentki w ciąży, osoby niezdolne do wyrażenia zgody.

4. METODY REKRUTACJI PRZEDMIOTÓW:

   Wszyscy pacjenci zakwalifikowani do zabiegu cytoredukcyjnego z powodu raka otrzewnej w Mercy Medical Center w Des Moines, IA (MMC). Badanie to będzie oferowane w gabinecie przedoperacyjnym lub podczas wizyty w szpitalu przez dr Franko lub dr Goldmana.

5. ŚWIADOMA ZGODA:

   Przyłączony

6. PROCEDURY BADAŃ:

   Zostaną pobrane i przeanalizowane próbki cieczy. Pobierzemy wodobrzusze, wypłukiwanie otrzewnej, płyn perfuzyjny HIPEC. Próbki zostaną przeanalizowane za pomocą cytometrii przepływowej, rutynowej cytologii płynów i zbadane pod kątem właściwości przeciwdrobnoustrojowych.

   6.1 Przykładowe oznakowanie:

   Zostanie pobrana następująca próbka płynu otrzewnowego:

   A - wodobrzusze lub wypłukanie soli fizjologicznej z otrzewnej na początku przypadku B - płyn HIPEC po wstępnym ogrzaniu i bezpośrednio przed podaniem środka chemioterapeutycznego C, D, E - płyn HIPEC po 30, 60 i 90 minutach perfuzji 6.2 Cytometria przepływowa Próbki płynów będą przepuścić przez cytometrię przepływową w celu analizy proporcji komórek CD3, CD4, CD8, CD20, CD34-dodatnich.

   6.3 Cytologia Rutynowa cytologia płynu otrzewnowego stanowi standard opieki w diagnostyce choroby nowotworowej i będzie prowadzona zgodnie ze zwykłym planem diagnostycznym.

   6.4 Wykrywanie właściwości przeciwdrobnoustrojowych Próbki płynów zostaną wprowadzone do hodowli bakterii w laboratorium mikrobiologicznym MMC. Rejestrowane będzie zahamowanie wzrostu standardowych szczepów bakteryjnych (Staphylococcus aureus, Escherichia coli). Próbki zostaną również przesłane do cytologii przepływowej i ewentualnie chromatografii w celu dokładnego zmierzenia stężeń chemioterapeutyku pozostającego w próbkach.

   6.5 Wysokosprawna chromatografia cieczowa Ograniczona liczba próbek zostanie przeanalizowana za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej w celu określenia dokładnego stężenia chemioterapii pozostałej w próbce (den Hartigh 1981). Ta część badań jest prowadzona we współpracy z dr Brianem Gentry z Drake University. Próbka dostarczona do tej części badań zostanie zdeidentyfikowana, opatrzona datą i czasem, a zespół Drake'a nie otrzyma żadnych innych informacji klinicznych ani demograficznych. Ponowna identyfikacja w MMC pozostaje możliwa.

   Aby zaspokoić potrzeby metodologiczne, z każdego przypadku będziemy pobierać 2 próbki: Próbka B będzie roztworem perfuzatu HIPEC po zakończeniu wstępnego okresu podgrzewania, pobrana przed dodaniem środka chemioterapeutycznego. Próbka E zostanie poddana perfuzatowi po zakończeniu procedury HIPEC, która powinna zawierać MMC. Próbka E jest główną próbą badawczą. Objętość próbki wynosi 5 cm3.

7. GROMADZENIE I ANALIZA DANYCH:

   Próbkę B otrzymuje się przed dodaniem do roztworu aktywnego środka do obróbki. Odpowiada to małej objętości pobierania 5 cm3 z około 3-5 litrów roztworu HIPEC stosowanego w zwykłym przypadku. Średnie kliniczne dawkowanie roztworu nośnika wynosi 2 litry/m2 powierzchni ciała pacjenta, co stanowi < 0,2% całkowitej objętości roztworu nośnika HIPEC. Próbki C i D reprezentują tę samą objętość, ale są pobierane od pacjenta z aktywnym leczeniem. Biorąc pod uwagę bardzo małą objętość każdej próbki, nie oczekuje się negatywnego efektu, ponieważ całkowita objętość próbki wynosi <0,6% całkowitego płynu perfuzyjnego HIPEC.

   Wszystkie inne próbki badawcze pochodzą wyłącznie z resztkowych próbek chirurgicznych uzyskanych wyłącznie do celów leczenia. Zbieranie danych będzie obejmować między innymi imię i nazwisko pacjenta, płeć, wiek, początkowy stopień zaawansowania nowotworu, aktualny stopień zaawansowania i rozległość guza, histologię, wcześniejsze metody leczenia oraz wyniki cytometrii przepływowej, mikrobiologii i HPLC, a także dokumentację medyczną z 60 miesięcy po operacji.

8. POTENCJALNE ZAGROŻENIA:

   8.1 Zagrożenia związane z pobieraniem próbek: Niektóre próbki płynów ustrojowych są pobierane z pozostałości chirurgicznych pobranych od pacjenta w celu leczenia (próbki A i E) i są niezależne od badań. Wyjątkiem są Próbki B,C,D - jedyne próbki pobierane od pacjenta wyłącznie w celach badawczych. Objętość każdej próbki jest niewielka, < 0,2% całkowitej objętości perfuzatu; zatem całkowita objętość próbki w ≤0,6% oczekiwanej objętości perfuzatu. Biorąc pod uwagę te dwa fakty, uzasadnione jest założenie, że nie ma oczekiwanego wpływu na wyniki pacjentów.

   8.2 Ryzyka związane z utratą poufności W związku z gromadzeniem danych umożliwiających identyfikację istnieje potencjalne ryzyko naruszenia poufności. Aby chronić poufność i zminimalizować ryzyko, dane badawcze będą przechowywane na komputerach MMC z dostępem ograniczonym do głównego zespołu badawczego i pliku chronionego hasłem. Zachowane zostaną przepisy dotyczące prywatności.

9. MATERIAŁY BADAWCZE, ZAPISY I PRYWATNOŚĆ:

   Baza danych badań będzie utrzymywana na komputerach MMC z uprzywilejowanym dostępem ograniczonym do podstawowego zespołu badawczego i pliku chronionego hasłem. Zachowane zostaną przepisy dotyczące prywatności.

10. POUFNOŚĆ:

Żadna próbka do badań nie będzie przechowywana. Wszystkie próbki badawcze zostaną zniszczone zgodnie ze zwykłymi procedurami laboratoryjnymi.

Dane elektroniczne będą przechowywane do czasu przeprowadzenia ostatniej analizy. Dostęp do danych będzie ograniczony do upoważnionego personelu związanego z tym badaniem.

Próbki dostarczone do Drake University są anonimizowane i nie mogą być ponownie zidentyfikowane przez zespół Drake University. Dlatego nie oczekuje się utraty poufności.