Badanie fenotypu i epidemiologii zespołu policystycznych jajników (PCOS) w Kolumbii (PEP - Kolumbia). (PEP-Colombia)

Podczas pierwszej wizyty do udziału w badaniu zostaną zaproszeni potencjalni uczestnicy badania, skierowani na rutynowe badania medycyny pracy przed przyjęciem w Centrum Medycznym Colmédicos. Kwalifikujący się uczestnicy badania zostaną poinformowani o celach badania i protokole badania, a kopia formularza zgody zostanie im wręczona. Poufny rejestr badań zawierający dane potencjalnych uczestników badania (imię i nazwisko, wiek, wzrost, wagę i kontakt) zostanie uruchomiony pierwszego dnia wizyty. Świadoma pisemna zgoda zostanie uzyskana od każdego uczestnika badania przed rekrutacją do badania w pierwszej wizycie ewaluacyjnej. Dane osobowe wszystkich uczestników badania będą chronione zgodnie z prawem (ley 1581de Kolumbia).

1. Wizyta ewaluacyjna nr 1:

   Po uzyskaniu świadomej zgody dane zostaną zebrane od każdego uczestnika badania przy użyciu standardowego formatu w formularzu raportu klinicznego (CRF) w celu jednolitego gromadzenia danych od wszystkich uczestników. Każdy CRF będzie opatrzony unikalnym seryjnym numerem identyfikacyjnym i będzie napisany w lokalnym języku. CRF zostanie wypełniona przez przeszkolonego badacza (w tym PI, współbadaczy i medycznie przeszkolonych asystentów badawczych). Wszystkie CRF zostaną sprawdzone pod kątem brakujących danych w ciągu 24 godzin od zakończenia, a wszelkie brakujące dane zostaną natychmiast wykryte i zebrane. W żadnym momencie personel badawczy nie będzie miał dostępu do medycznej dokumentacji zawodowej uczestnika, zgodnie z ograniczeniami określonymi w ustawodawstwie kolumbijskim (rezolucja 2346 de 2007, R 1918 de 2011).

   Każdy uczestnik zostanie poddany pomiarom antropometrycznym (waga, wzrost, obwód talii i bioder) oraz badaniu przedmiotowemu pod kątem hirsutyzmu, trądziku, łysienia, rogowacenia czarnego, powiększenia tarczycy. Uczestnicy z początkowym wynikiem hirsutyzmu (mFG) wynoszącym 4 lub więcej (≥ 4) zostaną ponownie zbadani przez lekarza. Podczas pierwszej wizyty w Colmédicos u wszystkich uczestniczek zostanie wykonane przezpochwowe lub przezbrzuszne badanie ultrasonograficzne miednicy na podstawie wywiadu seksualnego i formularza zgody przez przeszkolonych ginekologów, którzy są częścią badaczy. Ultrasonografia przezpochwowa jest przyjętą i zwalidowaną metodą oceny morfologii jajników w badaniu pacjentek z PCOS.

   Po całonocnym poście trwającym co najmniej 6 godzin (najlepiej), od każdego uczestnika badania zostanie pobrana 18 ml próbka krwi żylnej (tj. podstawowa próbka na czczo). Około 12 ml krwi żylnej zostanie pobrane do zwykłych probówek w celu kriokonserwacji surowicy i późniejszej analizy, a pozostała część w gładkich probówkach do natychmiastowego oznaczenia glukozy w surowicy.

2. Przetwarzanie próbki:

   Początkowe próbki krwi zostaną oznaczone unikalnym numerem identyfikacyjnym uczestnika, godziną i datą pobrania krwi oraz datą ostatniej miesiączki (LMP). Próbki będą pobierane przez przeszkolony personel laboratorium z centrum medycznego Colmédicos w godzinach porannych (od 08:00 do 10:00), niezależnie od cyklu miesiączkowego uczestniczki. Uczestniczki z oligomenorrhea lub amenorrhea będą miały wykonany test ciążowy moczu przed pobraniem krwi.

   W laboratorium Colmédicos próbki krwi zostaną rozdzielone na surowicę, osocze i krew pełną poprzez wirowanie przez 20 minut przy 3000 obr./min. Próbki biologiczne będą przechowywane w małych porcjach (po 1,25 ml) w plastikowych pojemnikach o pojemności od 1,5 do 2,0 ml (około 4 kriofiolek) odpornych na temperatury do -80 stopni Celsjusza. Próbki podzielone na porcje zostaną przesłane do laboratorium ABAD Zona 2 SUR (Carrera 32 nr 2 Sur 47 lokal 9701) w pojemnikach z suchym lodem przez pracowników laboratorium, gdzie będą przechowywane w temperaturze -20 stopni Celsjusza przez maksymalnie 3 miesiące do przetwarzanie. W razie potrzeby, w celu dłuższego przechowywania, próbki zostaną przekazane do laboratorium Inser Medellin i przechowywane w temperaturze -80 stopni Celsjusza, gdzie pozostaną w areszcie do czasu ich wykorzystania lub ostatecznego usunięcia zgodnie z ustalonym instytucjonalnym protokołem gospodarowania odpadami.

3. Analizy hormonalne i chemiczne:

   Próbki do testu hormonalnego i wstępnej oceny będą dostarczane w regularnych odstępach czasu do analizy co tydzień, aby zapewnić uczestnikom badania wyniki na czas, umożliwić klasyfikację uczestników i zminimalizować wpływ zmienności między testami. Ponadto pozwoli nam to w odpowiednim czasie skontaktować się z uczestnikami, którzy wymagają dodatkowych badań.

   Wszyscy uczestnicy będą oceniani w sposób jednolity niezależnie od fazy cyklu, w której się znajdują.

4. Ocena osób z „możliwym PCOS”:

   Kohorta uczestniczek, które początkowo wykazują cechy kliniczne sugerujące PCOS (tj. HA, OA lub PCOM, zostanie oznaczona jako „Możliwe PCOS” i zostanie poddana następującym pomiarom w swoich próbkach:

   1. U wszystkich pacjentek z „możliwym PCOS” TSH, prolaktyna (PRL) i 17-HP zostaną zmierzone w podstawowych próbkach surowicy, a także glukozy na czczo.

      Uwaga: Wszystkie osoby z rozpoznanym PCOS powinny mieć prawidłowe TSH, PRL i 17-HP (podstawowo lub po ostrej stymulacji ACTH).

   2. U kobiet z objawami klinicznymi HA+OA, jeśli przeprowadzone TV-U/S wykazuje PCOM, pacjentkę klasyfikuje się jako mającą fenotyp A PCOS (HA+OA+PCOM); jeśli nie, osobnik jest klasyfikowany jako mający fenotyp PCOS B (HA+OA).
   3. U pacjentek z objawami klinicznymi tylko HA powróci podczas fazy lutealnej (dni 21-24) ich cyklu miesiączkowego w celu określenia poziomu progesteronu (P4) w surowicy. Osoby z HA wykazujące OA (tj. lutealne P4 < 3 ng/ml) zostaną sklasyfikowane jako mające fenotyp A PCOS, jeśli mają PCOM według TV-U/S (HA+OA+PCOM) lub PCOS fenotyp B (HA+OA ), jeśli nie wykazują PCOM. Osoby z HA, które również wykazują PCOM, ale nie mają OA (tj. lutealne P4 ≥3 ng/ml), zostaną sklasyfikowane jako fenotyp C PCOS. Uczestniczki z HA, ale bez PCOM lub OA, zostaną sklasyfikowane jako mające izolowaną HA.
   4. U pacjentów z objawami klinicznymi tylko z chorobą zwyrodnieniową stawów podstawowe próbki surowicy będą badane pod kątem poziomu androgenów (całkowitego [TT] i wolnego testosteronu [FT], siarczanu dehydroepiandrosteronu [DHEAS] i androstendionu [A4]). Osoby z OA, które wykazują HA (tj. podwyższony poziom androgenów), zostaną sklasyfikowane jako mające fenotyp A PCOS, jeśli mają PCOM według TV-U/S (HA+OA+PCOM) lub fenotyp PCOS B (HA+OA), jeśli tak nie wyświetlać PCOM. Osoby z ChZS, które również wykazują PCOM, ale nie mają HA (tj. normalny poziom androgenów), zostaną sklasyfikowane jako fenotyp D PCOS. Uczestniczki z OA, ale bez PCOM lub HA, zostaną sklasyfikowane jako mające izolowaną OA.
   5. Pacjentki zgłaszające się z PCOM przez TV-U/S powrócą podczas fazy lutealnej (dni 22-24) swojego cyklu miesiączkowego na poziom progesteronu (P4) w surowicy, a ich podstawowe próbki surowicy zostaną przebadane pod kątem poziomu androgenów (całkowity [TT] i wolny testosteron [FT], siarczan dehydroepiandrosteronu [DHEAS] i androstendion [A4]). Osoby z PCOM, które wykażą OA (tj. lutealne P4 < 3 ng/ml) zostaną sklasyfikowane jako mające fenotyp D PCOS. Jeśli wykażą również HA (tj. podwyższone poziomy androgenów) (HA+OA+PCOM) zostaną sklasyfikowane jako mające PCOS fenotyp A. Pacjentki z PCOM, które również wykazują HA, ale bez OA (tj. lutealne P4 ≥3 ng/ml) zostaną sklasyfikowane jako fenotyp C PCOS. Uczestniczki z PCOM, ale bez HA lub OA zostaną sklasyfikowane jako mające izolowany PCOM.

5. Diagnozowanie PCOS:

   Zaburzenia pokrewne lub imitujące zostaną wykluczone na podstawie wywiadu, badania fizykalnego oraz TSH, PRL i 17-OHP w surowicy. Uczestnicy badania z podstawowym stężeniem 17-OHP >2 ng/ml (lub 200 ng/dl) zostaną poddani powtórnemu pomiarowi stężenia 17-OHP w fazie folikularnej, a jeśli stężenie 17-OHP nadal będzie > 2 ng/ml, zostanie podany ostry hormon adrenokortykotropowy (ACTH ) zostanie przeprowadzony test stymulacji w celu wykluczenia nieklasycznego wrodzonego przerostu nadnerczy (NCAH). Szacujemy, biorąc pod uwagę nasze wcześniejsze dane, że około 6% badanych przesiewowych będzie wymagało testu ostrej stymulacji ACTH.

   Ogólnie rzecz biorąc, PCOS zostanie zdiagnozowane, gdy pacjentki będą miały HA+OA+PCOM (fenotyp A), HA+OA (fenotyp B), HA+PCOM (fenotyp C) i OA+PCOM (fenotyp D) oraz wykażą prawidłowy poziom TSH (0,37 do 4,7 mUI/L), PRL (<25 ng/mL) i 17-OHP, zgodnie z naszym algorytmem diagnostycznym.

6. Wizyta ewaluacyjna nr 2:

   W następujących przypadkach uczestnicy zostaną przeniesieni na drugą wizytę ewaluacyjną (wizyta ewaluacyjna nr 2) w celu dodatkowej oceny:

   1. Wszystkie pacjentki z PCOS zostaną zaplanowane na wizytę ponowną w celu poddania się 2-godzinnemu doustnemu testowi obciążenia 75 g glukozy (OGTT) z 3 ml krwi żylnej pobranej do probówek z surowicą po 0 minutach i 120 minutach po obciążeniu glukozą. Poziomy glukozy i insuliny (z probówek z surowicą) będą oceniane po 0 i 120 minutach.
   2. Uczestniczki zostaną poddane ponownej ocenie podczas fazy folikularnej cyklu miesiączkowego (między 1. a 5. dniem):

   I. Z powtórzeniem USG w przypadku stwierdzenia dominującego pęcherzyka (≥ 10 mm) lub torbieli jajnika podczas wstępnej oceny USG.

   II. Powtórzyć pomiar 17-hydroksyprogesteronu (17-OHP) w przypadku, gdy początkowy 17-OHP wynosi >2 ng/ml i został uzyskany podczas fazy lutealnej zgodnie z historią miesiączki. Oczekuje się, że około 50% uczestników ocenianych w fazie lutealnej będzie miało 17-OHP >2 ng/ml.

   iii. Test ostrej dożylnej (iv) stymulacji ACTH-1-24 (0,25 mg), jeśli początkowe i powtórne stężenie 17-OHP uzyskane podczas fazy folikularnej, zgodnie z wywiadem menstruacyjnym, wynosi > 2 ng/ml.

7. Ponowna ocena poziomu hormonów:

Po zakończeniu badania w laboratorium referencyjnym zostanie przeprowadzona powtórna analiza próbek pod kątem poziomu androgenów u wszystkich pacjentek z PCOS i grupy „super-kontroli” (30 kontroli). Poziom glukozy na czczo należy również analizować w grupie superkontroli (100 kontroli). Analizę genetyczną można przeprowadzić w zależności od dostępności wsparcia finansowego w laboratorium referencyjnym.