Klinické hodnocení rychlého RNA testu na Covid-19 (CERrnaTc-19)

Rychlá a přesná diagnostika Covid-19 by výrazně pomohla zlepšit klinickou péči o pacienty s příznaky možného Covid-19. V současné době trvá oznámení výsledků standardního testu na virus 2–3 dny. Oxfordský institut biomedicínského inženýrství navrhl nový test, který může přinést výsledky za 30 minut. To používá výtěr z nosu/krku jako současný standardní test.

V první fázi pokusu byl výtěr odeslán do laboratoře v suché zkumavce. V laboratoři byl tampon vložen do lahvičky s 1 ml vody a malé množství (25 ul) vody bylo vloženo do zkumavky. Tato zkumavka obsahovala materiály, které dokážou detekovat přítomnost nového koronaviru (SARS-CoV-2). Zkumavka se pak jednoduše zahřeje na 65 °C po dobu 30 minut, a pokud je přítomen koronavirus, činidlo změní barvu z růžové na žlutou (pozitivní). Pokud ve vzorku není přítomen žádný virus, barva zůstává růžová (negativní). Toto je navrženo jako velmi jednoduchý test, který nevyžaduje speciální dovednosti nebo vybavení, a mohl by být tedy proveden v nemocnicích a dokonce i v primární péči. V této studii jsme se zaměřili na vyhodnocení přesnosti tohoto nového testu. Plánovali jsme odebrat druhý výtěr od pacientů s podezřením na Covid-19 ve Watford General Hospital (kteří byli stejně testováni) a použít tyto výtěry k provedení nového testu (v ideálních laboratorních podmínkách) i standardního testu. Protože jsme si nebyli jisti přesností nového testu, jeho výsledky nebyly použity k rozhodování o léčbě pacienta. V počáteční kohortě 173 pacientů byly u některých vzorků zaznamenány nesrovnalosti ve srovnání s výsledky referenční laboratoře. Poté jsme zjišťovali, zda pacienti, kteří měli pozitivní rychlý test RNA, ale negativní test „zlatého standardu“, byli skutečně pozitivní, a to tak, že jsme je pozvali, aby si nechali udělat test na protilátky. To odhalilo, že 20 ze 161 pacientů s negativním referenčním testem mělo falešně pozitivní výsledek rychlého testu. Tyto falešně pozitivní výsledky mohou být důsledkem interferujících látek v klinických vzorcích, které ovlivňují kolorimetrickou detekci založenou na změnách pH.

S ohledem na tyto první výsledky a zpětnou vazbu provedl tým Oxfordu v rychlém testu řadu úprav:

1. Virová inaktivace - tampón se umístí do fyziologického roztoku a zahřívá na 95 °C po dobu 5 minut - což zabíjí virus a umožňuje bezpečné použití v místě péče
2. Vzorek se zředí 1:10, aby se zabránilo interakci se slinami
3. Byl přidán "molekulární přepínač", aby se zabránilo falešným pozitivním výsledkům.

Poté byla hodnocena diagnostická přesnost modifikovaného testu. Vyzvali jsme pacienty, kteří byli vyšetřováni, a pacienty, kteří byli vyšetřeni a byli shledáni pozitivní, aby se zúčastnili této studie. Protože prevalence COVID-19 mezi testovanými pacienty byla nižší, než jsme odhadovali při výpočtu velikosti vzorku (pouze 12 ze 173 bylo pozitivních v referenčním testu), byl vzorek navýšen o dalších 300 pacientů. Naším cílem bylo rychle zjistit, zda je upravený test přesný.

Rychlý test RNA má potenciál být užitečným screeningovým nástrojem, pokud rychlým a proveditelným přístupem získá srovnatelnou citlivost se současným „zlatým standardem“.