Vorbehandlung hochverdächtiger pigmentierter Hautläsionen mit Interleukin-2 (IL-2)

Diese Studie soll in erster Linie bestimmen, ob bei Patienten mit höchst verdächtigen pigmentierten Läsionen als Reaktion auf intraläsionales IL-2 eine tumorspezifische Immunität erzeugt werden kann und ob diese Immunität Resistenz gegen Melanommetastasen verleihen kann. Die Patienten werden von qualifizierten Dermatologen identifiziert und Gespräche werden in der Chirurgieklinik (4. Etage Dickson Center) QEII HSC, NSHA geführt.

Die Standardwartezeit von der Konsultation bis zur chirurgischen Biopsie beträgt bis zu 4 Wochen. Die Prüfärzte stellen sicher, dass die Patienten sofort nach Benachrichtigung durch den teilnehmenden Dermatologen untersucht werden und alle Forschungskomponenten der Studie innerhalb der normalerweise erwarteten Wartezeit abgeschlossen werden. Durch die Nutzung dieser Standardwartezeit kann intraläsionales IL-2 möglicherweise eine Immunantwort beeinflussen, die andernfalls nach Abschluss der Biopsie nicht erreicht werden könnte. Da die Studie innerhalb der normalen Wartezeit durchgeführt wird, weicht sie nicht vom üblichen Behandlungsstandard ab. Gemäß dem Studienprotokoll erhalten die Patienten intraläsionale Injektionen an Tag 1 (Besuch in Woche 1) und Tag 8 (Besuch in Woche 2) und Exzisionsbiopsien werden an Tag 15 (Besuch in Woche 3) durchgeführt, weit innerhalb der akzeptierten Wartezeit nach der Konsultation zu biopsieren. Die intraläsionalen Injektionen und die Entnahme von Bioproben nach der Biopsie weichen vom normalen Behandlungsstandard ab, verzögern ihn jedoch nicht. Neben der Erstberatung sind zwei weitere Besuche erforderlich.

Diese Studie ist eine randomisierte, kontrollierte Doppelblindstudie. Patienten mit höchst verdächtigen pigmentierten Läsionen werden durch einen Algorithmus zufällig einer von zwei Gruppen zugeordnet: 1) Patienten der Behandlungsgruppe werden intraläsional mit IL-2 (Proleukin (Aldesleukin), Novartis Pharmaceuticals Canada Inc.) in einer Dosis von 500.000 International behandelt Einheiten (IE) in 0,1 ml sterilisierter Kochsalzlösung (0,9 %, m/v) für 2 Behandlungszyklen im Abstand von 1 Woche (Tag 1 und Tag 7); 2) Patienten der Kontrollgruppe werden intraläsional mit sterilisierter Kochsalzlösung (0,9 %, m/v) des gleichen Volumens (0,1 ml) behandelt. Die Randomisierung wird durch einen Random-Block-Algorithmus für jeden Patienten generiert, und die Anweisungsvorbereitung für jeden Patienten wird an die Apotheke gesendet. IL-2 (Proleukin) wird von der Apotheke von Novartis bezogen und vom Forschungsdienstkonto von Dr. Carman Giacomantonio bezahlt. Die Apotheke wird angewiesen, entweder eine IL-2-Behandlung oder eine injizierbare Kontrolle (Kochsalzlösung) vorzubereiten. Die Apotheke vergibt eine kodifizierte ID, die zusammen mit der Spritze mit dem Namen des Patienten mit der Aufschrift „Interleukin-2/Placebo“ geliefert wird (daher Verblindungsstudie für Arzt und Patient). Als Pilotstudie besteht das Prinzip des Designs darin, die Durchführbarkeit einer größeren und teureren Studie nach der vorgeschlagenen Methodik und dem vorgeschlagenen Protokoll zu testen. Daher gibt es mindestens 20 (10 Behandlungen, 10 Placebo) Teilnehmer (bis zu einem Maximum von 60). Es wird geschätzt, dass die statistische Signifikanz bei 20 Patienten erreicht wird, wenn sie jedoch nach 20 Patienten nicht erreicht wird, werden weitere 10 (5 Behandlungs-, 5 Kontroll-) Patienten eingeschlossen. Wenn die Signifikanz nach 30 Patienten immer noch nicht erreicht ist, werden weitere 10 Patienten eingeschlossen und so weiter bis zu einem Maximum von 60 Patienten. Wenn nach 60 Patienten keine Signifikanz erreicht wird, wäre eine weitere Rekrutierung unter dem aktuellen Protokoll nicht logisch und daher müsste die Methodik überarbeitet oder die Studie abgebrochen werden.

An Tag 1 (erste Behandlung) und 15 (Exzisionsbiopsie) werden allen Patienten Blut- (4 Fläschchen) und Urinproben (25–50 ml) entnommen. Lokale Reaktionen auf Injektionen werden auf unspezifische Anzeichen wie Blutungen, Artheme, Infektionen oder Reizungen überwacht. Die Ermittler erwarten in diesem kurzen Zeitraum keine spezifischen Veränderungen der pigmentierten Läsion im Zusammenhang mit der Injektion, jedoch werden alle Veränderungen notiert.

An Tag 15, nach der zweiten intraläsionalen Injektion, wird eine Exzisionsbiopsie nach standardmäßigen chirurgischen Techniken wie folgt durchgeführt: Eine Ellipse der Haut, die die pigmentierte Läsion umfasst und sich in das subkutane Fett erstreckt, wird durchgeführt, um einen grob klaren, aber schmalen Exzisionsrand zu erreichen. Dieser kleine Defekt wird primär mit Einzelknopfnähten verschlossen. Die biopsierte Probe wird anschließend mit histologischen Standardtechniken ausgewertet, um Diagnosen zu bestätigen, den Randstatus (frei oder befallen) und die Tiefe der Läsionsinvasion zu beurteilen. Die Tiefe der Läsionsinvasion bestimmt das Ausmaß der nachfolgenden chirurgischen Exzisionen und die Auswahl der Ränder gemäß den Standardrichtlinien des National Comprehensive Cancer Network (NCCN). Intraläsionale Injektionen von 0,1 ml vor der Biopsie in die Läsion verändern weder die Abmessungen noch die Architektur der Läsion oder beeinflussen das Ausmaß der anschließend erforderlichen Biopsie. Läsionen, die als zu groß für einen Verschluss ohne Gewebemanipulation oder Lappenbildung empfunden werden, werden mit einer Stanzbiopsie-Probenahmetechnik biopsiert, wobei Gewebescheiben mit 4 mm Durchmesser aus repräsentativen Bereichen der Läsion entnommen werden, um die Diagnose und die Tiefe zu bestätigen Invasion. Die Tiefe der Invasion bestimmt das Ausmaß und die Komplexität der nachfolgenden Operation, die erforderlich ist, um die Läsion zu entfernen und klare Ränder gemäß den NCCN-Richtlinien zu erzielen. Die biopsierte Probe wird wie folgt verarbeitet: Zur RNA-Analyse wird mit einer 22G-Nadel eine Feinnadel-Aspirationsbiopsie durchgeführt (die Nadel wird zweimal durch die Mitte der Läsion geführt). Der Rest des Gewebes wird zur histologischen Standardbeurteilung an die Pathologie geschickt. Der Pathologe wird auch das Ausmaß der beobachteten tumorinfiltrierenden Lymphozyten (TILs) im Zusammenhang mit der Behandlung im Vergleich zu Kontrollinjektionen angeben. Blut und Urin werden mit metabalomischen und proteomischen Methoden untersucht, um die systemische Immunantwort auf die Behandlung zu beurteilen.

Alle Blut-, Urin- und Läsionsbiopsieproben werden mit einer kodifizierten Nummer gekennzeichnet (enthalten keine patientenidentifizierenden Informationen) und sofort zur Lagerung in das Labor von Dr. Carman Giacomantonio an der Dalhousie University transportiert. Die Feinnadelaspiration ausgeschnittener Proben wird auf das tumorgenetische und epigenetische Profil untersucht. Blut und Urin werden auf proteomische bzw. metabolomische Profile untersucht.

Alle Studienteilnehmer werden 2 Jahre lang alle 4 Monate und in den Jahren 3 bis 5 nach der Erstintervention alle 4 Monate beurteilt, um den Krankheitsverlauf oder die Entwicklung neuer Melanome zu beurteilen und Vergleiche zwischen den Behandlungs- und Kontrollgruppen anzustellen. Es gibt keinen standardisierten Test oder messbaren Biomarker zur Beurteilung einer etablierten oder dauerhaften Immunität. Dieser Aspekt der Studie ist identisch mit der Patientenbeurteilung, die gemäß dem Behandlungsstandard für Melanompatienten durchgeführt wird. Auch hier werden alle Veröffentlichungen von Studienergebnissen ohne Informationen abgeschlossen, die zur Identifizierung der in die Studie eingeschlossenen Patienten verwendet werden könnten.