Identificación de la excreción del virus del herpes simple (VHS) en el tracto genital femenino de mujeres embarazadas y no embarazadas mediante GeneXpert PCR, PCR de rutina y cultivo

La prueba GeneXpert HSV PCR se validará frente a cultivos virales de HSV y PCR cuantitativa de rutina. La validación ocurrirá en dos poblaciones: 1) mujeres no embarazadas en clínicas de ITS con lesiones de HSV clínicamente aparentes (Grupo 1, n=300), y 2) mujeres embarazadas en trabajo de parto activo sin evidencia visible de infección por HSV (Grupo 2, n= 12.500). Todas las pruebas de muestras en la plataforma GeneXpert, la PCR cuantitativa de rutina y el cultivo viral se realizarán en el Laboratorio Central de la UAB. A las mujeres de cada grupo se les obtendrán muestras de lesiones genitales (Grupo 1) o hisopos vaginales (Grupo 2). Las muestras de todas las mujeres del Grupo 1 se evaluarán mediante cultivo de HSV, PCR de HSV de rutina y PCR de HSV GeneXpert. Aproximadamente la mitad de las mujeres del grupo 2 se someterán a la prueba de rutina HSV PCR y GeneXpert HSV PCR; las muestras del resto de las mujeres del Grupo 2 se almacenarán para posibles análisis en el futuro mediante PCR de rutina para HSV y GeneXpert HSV PCR. De esta manera, maximizaremos los datos a partir de los cuales comparar los resultados de la PCR de GeneXpert con la PCR de rutina, mientras mantenemos la flexibilidad para garantizar que una cantidad adecuada de muestras sean positivas para el ADN del HSV mediante la PCR de rutina.

Los hisopos de mujeres embarazadas en trabajo de parto se colocarán en medios de transporte viral, se congelarán a -20 ° C y se enviarán por lotes al Laboratorio Central de la UAB para su análisis en el instrumento GeneXpert y mediante PCR cuantitativa de HSV de rutina. Los hisopos de mujeres no embarazadas en clínicas de ITS se colocarán en medios de transporte viral, se refrigerarán a 4 °C y se enviarán al Laboratorio Central de la UAB para su análisis en tiempo real en el instrumento GeneXpert y mediante cultivo de HSV y PCR cuantitativa rutinaria de HSV. Las muestras de las primeras 300 mujeres inscritas en el Grupo 2 se analizarán como PCR de rutina individuales y en lotes de 5 muestras por análisis de PCR. De esta manera, validaremos que el nivel de detección de lotes de muestras para PCR de rutina es aceptable. Una vez que se produzca esta validación, las muestras de aproximadamente la mitad de las mujeres restantes del Grupo 2 se agruparán para el análisis de PCR de rutina en tiempo real. Si un lote de 5 muestras es negativo, no se realizarán más pruebas. Si un lote de 5 muestras es positivo, todas las muestras se separarán para volver a procesarlas como PCR individuales. Todos los especímenes evaluados por PCR de rutina también serán evaluados por GeneXpert PCR; de esta manera, tendremos resultados de PCR de rutina individuales para compararlos con los resultados de PCR de GeneXpert.

Se obtendrá una muestra de sangre de cada mujer no embarazada (Grupo 1) y embarazada (Grupo 2) en el momento de la inscripción, y si se determina que está excretando el HSV mediante PCR de rutina, PCR GeneXpert o cultivo, se realizarán pruebas serológicas específicas del tipo. será realizado. La correlación de la tipificación viral del muestreo virológico con el estado serológico de HSV-1 y HSV-2 permitirá la categorización de la infección (primer episodio primario, primer episodio no primario o infección recurrente).

Aquellas mujeres del Grupo 1 que tengan un cultivo positivo para VHS serán contactadas directamente cuando se conozca el resultado. Las mujeres del Grupo 2 con un resultado positivo de la PCR para HSV no serán contactadas porque la PCR para HSV de rutina y la PCR GeneXpert no son pruebas aprobadas por la FDA en esta población; por lo tanto, no conoceremos las características de rendimiento de la prueba (p. ej., sensibilidad, especificidad, etc.) hasta que finalice la prueba. Todas las mujeres embarazadas del Grupo 2 recibirán materiales escritos en el momento de la inscripción para educarlas sobre los signos y síntomas de la enfermedad neonatal por VHS. Todas las mujeres posparto serán contactadas por teléfono entre 60 y 90 días después del parto y se realizará una consulta para determinar si sus bebés desarrollaron la enfermedad neonatal por VHS.

Los datos sobre la incidencia de la enfermedad neonatal por HSV entre los bebés nacidos de mujeres del Grupo 2 se compararán con los datos de incidencia de Brown et al.1 En su estudio de casi 60 000 mujeres realizado durante un período de 20 años, este grupo de investigadores ha informado una tasa de incidencia de la enfermedad neonatal por HSV de 1 en 3.200 nacidos vivos.