Identificazione della diffusione del virus Herpes Simplex (HSV) nel tratto genitale femminile di donne gravide e non gravide mediante PCR GeneXpert, PCR di routine e coltura

Il test GeneXpert HSV PCR sarà convalidato rispetto alle colture virali di HSV e alla PCR quantitativa di routine. La convalida avverrà in due popolazioni: 1) donne non gravide in cliniche STI con lesioni da HSV clinicamente evidenti (Gruppo 1, n=300) e 2) donne in gravidanza in travaglio attivo senza evidenza visibile di infezione da HSV (Gruppo 2, n= 12.500). Tutti i test dei campioni sulla piattaforma GeneXpert, la PCR quantitativa di routine e la coltura virale verranno eseguiti presso il laboratorio centrale dell'UAB. Le donne di ciascun gruppo avranno campioni ottenuti da lesioni genitali (Gruppo 1) o tamponi vaginali (Gruppo 2). I campioni di tutte le donne del Gruppo 1 saranno valutati mediante coltura HSV, HSV PCR di routine e GeneXpert HSV PCR. Circa la metà delle donne nel Gruppo 2 sarà testata mediante PCR HSV di routine e GeneXpert HSV PCR; i campioni delle altre donne del Gruppo 2 verranno conservati per eventuali test futuri mediante HSV PCR di routine e GeneXpert HSV PCR. In questo modo, ottimizzeremo i dati da cui confrontare i risultati della PCR GeneXpert con la PCR di routine, mantenendo la flessibilità per garantire che un numero adeguato di campioni sia positivo per il DNA dell'HSV mediante la PCR di routine.

I tamponi di donne in gravidanza in travaglio verranno collocati in terreni di trasporto virale, congelati a -20 ° C e spediti in lotti al laboratorio centrale UAB per l'analisi sullo strumento GeneXpert e mediante PCR quantitativa di routine dell'HSV. I tamponi di donne non gravide nelle cliniche STI verranno collocati in terreni di trasporto virale, refrigerati a 4 ° C e spediti al laboratorio centrale UAB per l'analisi in tempo reale sullo strumento GeneXpert e mediante coltura HSV e HSV PCR quantitativa di routine. I campioni delle prime 300 donne arruolate nel Gruppo 2 verranno eseguiti come singole PCR di routine e in lotti di 5 campioni per PCR. In questo modo, convalideremo che il livello di rilevazione dal batch di campioni per la PCR di routine è accettabile. Una volta avvenuta questa convalida, i campioni di circa la metà delle rimanenti donne del Gruppo 2 verranno raggruppati per l'analisi PCR di routine in tempo reale. Se un lotto di 5 campioni è negativo, non verranno eseguiti ulteriori test. Se un'analisi batch di 5 campioni è positiva, tutti i campioni verranno separati per essere nuovamente analizzati come singole PCR. Tutti i campioni valutati mediante PCR di routine saranno valutati anche mediante GeneXpert PCR; in questo modo, avremo i singoli risultati della PCR di routine per il confronto con i risultati della PCR GeneXpert.

Verrà prelevato un campione di sangue da ciascuna donna non incinta (Gruppo 1) e incinta (Gruppo 2) al momento dell'arruolamento e, se si determina che sta diffondendo l'HSV mediante PCR di routine, GeneXpert PCR o coltura, test sierologici specifici per tipo sarà eseguita. La correlazione della tipizzazione virale dal campionamento virologico con lo stato sierologico di HSV-1 e HSV-2 consentirà la categorizzazione dell'infezione (infezione primaria al primo episodio, non primaria al primo episodio o ricorrente).

Le donne del Gruppo 1 che hanno una coltura positiva per l'HSV saranno contattate direttamente quando il risultato sarà noto. Le donne del gruppo 2 con un risultato positivo della PCR per HSV non verranno contattate perché la PCR per HSV di routine e la PCR GeneXpert non sono test approvati dalla FDA in questa popolazione; pertanto, non conosceremo le caratteristiche delle prestazioni del test (ad es. sensibilità, specificità, ecc.) fino al completamento del processo. Tutte le donne incinte del Gruppo 2 riceveranno materiale scritto al momento dell'arruolamento che le educa sui segni e sui sintomi della malattia neonatale da HSV. Tutte le donne dopo il parto saranno contattate telefonicamente 60-90 giorni dopo il parto e verrà effettuata un'indagine per determinare se i loro bambini hanno sviluppato la malattia neonatale da HSV.

I dati sull'incidenza della malattia da HSV neonatale tra i bambini nati da donne del Gruppo 2 saranno confrontati con i dati sull'incidenza di Brown et al.1 Nel loro studio su quasi 60.000 donne condotto in un periodo di 20 anni, questo gruppo di ricercatori ha riportato un tasso di incidenza della malattia neonatale da HSV di 1 su 3.200 nati vivi.