Identyfikacja wydalania wirusa opryszczki pospolitej (HSV) w drogach rodnych kobiet ciężarnych i nieciężarnych za pomocą GeneXpert PCR, rutynowego PCR i hodowli

Test GeneXpert HSV PCR zostanie zwalidowany na podstawie kultur wirusa HSV i rutynowej ilościowej reakcji PCR. Walidacja zostanie przeprowadzona w dwóch populacjach: 1) kobiety niebędące w ciąży w klinikach STI z klinicznie widocznymi zmianami HSV (Grupa 1, n=300) oraz 2) kobiety w ciąży w trakcie aktywnego porodu bez widocznych dowodów zakażenia HSV (Grupa 2, n= 12500). Wszystkie testy próbek na platformie GeneXpert, rutynowe ilościowe PCR i hodowle wirusów będą wykonywane w Centralnym Laboratorium UAB. Kobiety w każdej grupie będą miały próbki pobrane ze zmian narządów płciowych (Grupa 1) lub wymazy z pochwy (Grupa 2). Próbki od wszystkich kobiet z grupy 1 zostaną ocenione za pomocą hodowli HSV, rutynowej HSV PCR i GeneXpert HSV PCR. Około połowa kobiet z grupy 2 zostanie przebadana za pomocą rutynowego testu HSV PCR i GeneXpert HSV PCR; próbki od pozostałych kobiet z grupy 2 będą przechowywane do ewentualnych testów w przyszłości za pomocą rutynowych testów HSV PCR i GeneXpert HSV PCR. W ten sposób zmaksymalizujemy dane, z których będziemy mogli porównać wyniki GeneXpert PCR z rutynowymi PCR, przy jednoczesnym zachowaniu elastyczności w celu zapewnienia, że ​​odpowiednia liczba próbek będzie dodatnia pod względem DNA HSV w rutynowej PCR.

Wymazy pobrane od ciężarnych kobiet w czasie porodu zostaną umieszczone w pożywce transportowej wirusów, zamrożone w temperaturze -20°C i wysłane partiami do Centralnego Laboratorium UAB w celu analizy na aparacie GeneXpert i rutynowej ilościowej PCR HSV. Wymazy od kobiet niebędących w ciąży w klinikach chorób przenoszonych drogą płciową zostaną umieszczone w pożywce do transportu wirusów, schłodzone w temperaturze 4°C i wysłane do Centralnego Laboratorium UAB w celu analizy w czasie rzeczywistym na instrumencie GeneXpert oraz hodowli HSV i rutynowej ilościowej reakcji PCR HSV. Próbki od pierwszych 300 kobiet włączonych do Grupy 2 będą analizowane jako indywidualne rutynowe PCR oraz w partiach po 5 próbek na cykl PCR. W ten sposób zweryfikujemy, czy poziom wykrywalności z porcjowania próbek do rutynowej reakcji PCR jest akceptowalny. Po przeprowadzeniu tej walidacji próbki od około połowy pozostałych kobiet z grupy 2 zostaną podzielone na partie do rutynowej analizy PCR w czasie rzeczywistym. Jeśli seria 5 próbek da wynik ujemny, dalsze badania nie będą wykonywane. Jeśli seria 5 próbek da wynik pozytywny, wszystkie próbki zostaną oddzielone do ponownego wykonania jako indywidualne PCR. Wszystkie próbki oceniane za pomocą rutynowego PCR będą również oceniane za pomocą GeneXpert PCR; w ten sposób uzyskamy wyniki indywidualnych rutynowych wyników PCR do porównania z wynikami GeneXpert PCR.

Próbka krwi zostanie pobrana od każdej kobiety niebędącej w ciąży (Grupa 1) i ciężarnej (Grupa 2) w momencie włączenia do badania, a jeśli rutynowe badanie PCR, GeneXpert PCR lub posiew wykaże, że jest ona nosicielem wirusa HSV, wówczas należy wykonać specyficzne dla typu badania serologiczne będzie wystawiany. Korelacja typowania wirusa z pobierania próbek wirusologicznych ze statusem serologicznym HSV-1 i HSV-2 pozwoli na kategoryzację infekcji (pierwotna infekcja pierwszego epizodu, pierwsza niepierwotna lub nawracająca infekcja).

Z kobietami z grupy 1, które mają pozytywny wynik hodowli HSV, skontaktujemy się bezpośrednio, gdy wynik będzie znany. Kobiety z grupy 2 z dodatnim wynikiem HSV PCR nie będą kontaktowane, ponieważ rutynowe HSV PCR i GeneXpert PCR nie są testami dopuszczonymi przez FDA w tej populacji; w związku z tym nie poznamy charakterystyki działania testu (np. czułości, swoistości itp.) do czasu zakończenia badania. Wszystkie kobiety w ciąży z grupy 2 otrzymają w momencie rejestracji pisemne materiały informujące je o oznakach i objawach choroby noworodków wywołanej wirusem HSV. Ze wszystkimi kobietami po porodzie skontaktujemy się telefonicznie 60-90 dni po porodzie i zostanie przeprowadzone zapytanie w celu ustalenia, czy u ich dzieci rozwinęła się noworodkowa choroba HSV.

Dane dotyczące zachorowalności noworodków na chorobę HSV wśród noworodków urodzonych przez kobiety z grupy 2 zostaną porównane z danymi zachorowalności uzyskanymi od Browna i wsp.1 W badaniu obejmującym prawie 60 000 kobiet przeprowadzonym w ciągu 20 lat ta grupa badaczy zgłosiła wskaźnik zachorowalności na chorobę HSV u noworodków wynosi 1 na 3200 żywych urodzeń.