Nuove terapie e biomarcatori per l'infezione da Chagas (TESEO)

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L'endpoint o la misura primaria di efficacia è una variabile binaria "curata" (successo), "non curata" (fallimento) basata su un totale di otto punti temporali qPCR dalla fine del trattamento (EOT) fino a 36 mesi di follow-up . Ciascuno dei punti temporali include un totale di tre esami qPCR sequenziali su campioni di sangue raccolti durante una visita. Pertanto, affinché un paziente possa essere considerato "guarito", è necessario documentare un totale di 24 risultati qPCR negativi.

Campioni di sangue da raccogliere all'EOT (30, 60 o 90 giorni) e a 4, 6, 12, 18, 24, 30 e 36 mesi di follow-up (con un periodo finestra di +/- 7 giorni dal 4 a 12 mesi e +/- 14 giorni da 18 a 36 mesi).

Valutare i cambiamenti nel tempo nel carico parassitario del sangue misurato da qPCR. L'unità per la qPCR è l'equivalente del parassita/ml di sangue (Par. Eq./mL). Il limite di rilevamento (LOD) e il limite di quantificazione (LOQ) per il dosaggio qPCR è 0,69 e 1,5 Par. Eq./mL di sangue, rispettivamente.

Le curve di sopravvivenza di Kaplan-Meier saranno disegnate per rappresentare il tempo di ricomparsa del carico parassitario del sangue per i pazienti che hanno eliminato il carico parassitario del sangue all'EOT (in quanto tale questo è un tempo di ricaduta per i pazienti "di successo") tra i gruppi di trattamento . Un modello di sopravvivenza a tempo discreto verrà utilizzato per analizzare questi dati temporali dell'evento.

Variazione del carico parassitario nel tempo valutata ai giorni 14-17, 59-62 e EOT (30, 60 o 90 giorni), in base al braccio di trattamento, e ai mesi 4, 6, 12, 18, 24, 30 e 36 di follow-up (con un periodo finestra di +/- 7 giorni da 4 a 12 mesi e +/- 14 giorni da 18 a 36 mesi), misurato mediante qPCR.

Valutare i cambiamenti nel tempo dei titoli sierologici e l'incidenza della sieroconversione negativa attraverso la sierologia convenzionale. Per eseguire questa analisi verrà utilizzato un kit commerciale di sierologia per la malattia di Chagas che utilizza una miscela antigenica del parassita (lisato). I campioni di siero di tutti i punti temporali dello studio per ciascun paziente saranno analizzati nella stessa piastra ELISA per evitare bias dovuti a variazioni interdosaggio.

Verranno utilizzati modelli a effetti misti lineari generalizzati per valutare la risposta sierologica convenzionale nel tempo. La variabile dipendente in entrambi i modelli sarà un parametro sierologico convenzionale binario. Il braccio di trattamento sarà incluso nel modello come effetto fisso. La significatività della covariata di trattamento sarà testata al livello di significatività a due code di 0,05 con il test del rapporto di verosimiglianza.

Valutare i cambiamenti nel tempo dei titoli sierologici e l'incidenza della sieroconversione negativa attraverso la sierologia convenzionale. Per eseguire questa analisi verrà utilizzato un kit commerciale di sierologia per la malattia di Chagas che utilizza antigeni parassitari ricombinanti. I campioni di siero di tutti i punti temporali dello studio per ciascun paziente saranno analizzati nella stessa piastra ELISA per evitare bias dovuti a variazioni interdosaggio.

Verranno utilizzati modelli a effetti misti lineari generalizzati per valutare la risposta sierologica convenzionale nel tempo. La variabile dipendente in entrambi i modelli sarà un parametro sierologico convenzionale binario. Il braccio di trattamento sarà incluso nel modello come effetto fisso. La significatività della covariata di trattamento sarà testata al livello di significatività a due code di 0,05 con il test del rapporto di verosimiglianza.

Valutare i cambiamenti nel tempo nel biomarcatore sierologico non convenzionale (BMK) "Lytic Anti-α-Gal Antibodies" e l'incidenza di sieroconversione negativa per esso, come misurato mediante chemiluminescenza (CL)-ELISA utilizzando T. cruzi tGPI-mucine come antigeni. L'unità CL-ELISA è il titolo (T). T è il rapporto tra le unità di luminescenza relativa (RLU) del siero testato e il valore limite (CV). Il CV viene calcolato definendo il limite superiore di previsione (come deviazione standard, DS), moltiplicato per un fattore in base al numero di controlli negativi (NC) e un intervallo di confidenza del 99,5%. Per ogni piastra di prova in cui sono incluse sei NC, il CV è definito come la media NC più 4,355 volte la DS. Un campione di siero è positivo quando T = o >1.000; negativo quando T = o < 0,900; e inconcludente quando T > 0.900, < 1.000.

I modelli a effetti misti lineari generalizzati (GLMM) definiranno in che modo questo BMK influisce sugli esiti binari della rimozione del parassita. La variabile BMK sarà inclusa nel modello, con misure ripetute.

Questo BMK è misurato mediante saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA), la cui unità è la densità ottica (OD) a 492 nm. Cutoff: un risultato negativo verrà considerato quando i valori di OD = o 0,300, a una diluizione del siero di 1/200; risultati indeterminati saranno valori di OD compresi tra 0,200 e 0,300.

L'efficacia terapeutica comporterà un continuo e sostanziale calo della reattività dopo il trattamento. Una riduzione sostanziale deve essere almeno del 40% rispetto alla reattività a T0 (prima del trattamento). Un leggero aumento (= o

I modelli a effetti misti lineari generalizzati (GLMM) definiranno in che modo questo BMK influisce sugli esiti binari della rimozione del parassita. La variabile BMK sarà inclusa nel modello, con misure ripetute.

Questo BMK è misurato mediante saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA), la cui unità è la densità ottica (OD) a 492 nm. Cutoff: un risultato negativo verrà considerato quando i valori di OD = o 0,450, a una diluizione del siero di 1/200; risultati indeterminati saranno valori di OD compresi tra 0,300 e 0,450.

L'efficacia terapeutica comporterà un continuo e sostanziale calo della reattività dopo il trattamento. Una diminuzione sostanziale deve essere almeno del 30% rispetto alla reattività a T0 (prima del trattamento). Sarà consentito un leggero aumento (= o < 20%) della reattività contro il BMK subito dopo il trattamento rispetto a OD a T0.

Questo BMK è misurato mediante saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA), la cui unità è la densità ottica (OD) a 492 nm. Cutoff: un risultato negativo verrà considerato quando i valori di OD = o 0,350, a una diluizione del siero di 1/400; risultati indeterminati saranno valori di OD compresi tra 0,250 e 0,350.

L'efficacia terapeutica comporterà un continuo e sostanziale calo della reattività dopo il trattamento. Una riduzione sostanziale deve essere almeno del 40% rispetto alla reattività a T0 (prima del trattamento). Un leggero aumento (= o

I modelli a effetti misti lineari generalizzati (GLMM) definiranno in che modo questo BMK influisce sugli esiti binari della rimozione del parassita. La variabile BMK sarà inclusa nel modello, con misure ripetute.

Questo BMK è misurato mediante saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA), la cui unità è la densità ottica (OD) a 492 nm. Cutoff: un risultato negativo verrà considerato quando i valori di OD = o 0,350, a una diluizione del siero di 1/400; risultati indeterminati saranno valori di OD compresi tra 0,250 e 0,350.

L'efficacia terapeutica comporterà un continuo e sostanziale calo della reattività dopo il trattamento. Una riduzione sostanziale deve essere almeno del 40% rispetto alla reattività a T0 (prima del trattamento). Un leggero aumento (= o

I modelli a effetti misti lineari generalizzati (GLMM) definiranno in che modo questo BMK influisce sugli esiti binari della rimozione del parassita. La variabile BMK sarà inclusa nel modello, con misure ripetute.

Valutare i cambiamenti nel tempo nel biomarcatore sierologico non convenzionale (BMK) "Trypomastigote Excreted/Secreted Antigens (TESA)" e l'incidenza di sieroconversione negativa per esso, come misurato dal test dell'aptamero.

L'unità del dosaggio dell'aptamero è l'unità di fluorescenza relativa (RFU). Un rapporto segnale/cutoff (S/CO) viene calcolato per ciascun campione clinico dividendo il valore RFU del campione di analisi per il cutoff (CO). Il CO è il valore RFU più elevato ottenuto dai campioni di controllo endemico inclusi in ciascuna corsa. L'S/CO di un controllo positivo incluso nella stessa corsa deve soddisfare criteri di accettazione prestabiliti per essere valido. Un campione con S/CO > 1.0 viene interpretato come positivo per la presenza del BMK (=infetto). Un campione con S/CO < 1 viene interpretato come negativo (= non infetto).

I modelli a effetti misti lineari generalizzati (GLMM) definiranno in che modo questo BMK influisce sugli esiti binari della rimozione del parassita. La variabile BMK sarà inclusa nel modello, con misure ripetute.