인플루엔자 A 및 B 환자의 면역 세포 하위 집단

배경:

2009년 3월 말과 4월 초에 멕시코에서 A/H1N1 인플루엔자(일반적으로 돼지 독감으로 알려짐)로 명명된 신종 인플루엔자 바이러스의 발생이 보고되었으며, 이후 많은 국가에서 사례가 관찰되어 세계 보건 기구의 선언으로 이어졌습니다. 세계적인 유행병.

이스라엘에서 첫 번째 인플루엔자 A/H1N1 사례는 2009년 4월 말 Laniado 병원에서 멕시코에서 돌아온 청년에게 진단되었습니다.

인플루엔자 A/H1N1(돼지 독감)은 특히 젊은 환자에서 상대적으로 높은 이환율을 나타냅니다. 조기 식별은 신속한 치료 시작을 가능하게 하여 결과를 개선합니다.

2009년 이스라엘에서 H1N1 전염병이 유행하는 동안 우리 소아과에서 연구가 수행되었습니다. 연구자 Sharon et al. (1) 인플루엔자 A H1N1에 감염된 53명의 어린이 그룹과 독감 증상을 나타내었지만 바이러스에 대해 음성으로 판명된 53명의 어린이 그룹을 비교했습니다. 이 비교는 질병의 급성기(1-3일) 동안 림프구 수의 현저한 감소와 7일(6-9)의 해결과 함께 고열이 시작된 후 5일에 호중구 수의 감소를 입증했습니다. 후속 해결은 2-4일 후(7-10일). H1N1 바이러스에 감염되지 않은 환자에서는 이러한 현상이 관찰되지 않았다. Cao와 공동저자(2)는 소아와 성인 환자 모두에서 유사한 결과를 보고했습니다. Lewis는 림프구 감소증이 주로 T 세포의 감소로 인한 것이며 B 세포의 감소 정도는 적다고 제안했습니다(3). 급성 질환 동안 인플루엔자 A H3N3의 전형적인 림프구 감소증은 CD4:CD8 비율의 변화 없이 T 및 B 세포 모두의 감소로 인한 것으로 나타났습니다. 이것은 Cao et al. (2) A H1N1에 대해 양성인 사람들의 절반에서 비정상적인 CD4:CD8 비율을 지적한 사람. Nichols와 Collaborators(4)가 제안한 가능한 설명 중 하나는 인플루엔자 감염 환자의 초기 림프구 감소증과 후기 호중구 감소증이 감염의 결과로 순환계에서 감염된 호흡기로 이러한 세포의 이동을 나타낼 수 있다는 것입니다. 우리 연구의 목표 Infuenza A H1N1에 의해 유발된 질병의 여러 단계 동안 림프구의 B, T 및 NK 집단을 정량화합니다.

연구 방법 연구 대상은 독감의 징후와 증상으로 우리 부서에 입원한 아동이었다. 참가자의 부모 또는 법적 보호자가 서면 동의서에 서명했습니다. 첫 번째 단계에서 Infuenza A H1N1의 존재를 확인하기 위해 상기도 면봉을 채취했습니다(바이러스 식별은 RT - PCR로 수행됨). 그런 다음 질병의 여러 단계에서 림프구의 다른 하위 유형을 정량화했습니다. 상이한 세포 유형의 식별 및 정량화는 FACS 방법에 의해 수행되었으며, 표시된 세포 수용체는 CD31, CD19, CD4, CD3, CD45, CD8, CD56이었다.

실험실 기술:

세포 마커는 유동 세포 계측법으로 평가되었습니다. 5 ml FACS 튜브에서 미리 냉각된 PBS를 사용하여 단일 세포 현탁액에서 세포 염색을 수행했습니다. 세척 단계는 5분 동안 300g, 5°C, 브레이크 5 동안 원심분리에 의해 수행되었으며, 그 후 상청액을 완전히 피펫으로 제거하고 세포 펠릿(일반적으로 0.2-1.0×106 세포)를 0.5% 소 혈청 알부민이 보충된 100 μl PBS(Ca++ 및 Mg++ 없음)에 재현탁하고, 특정 형광색소 결합 항인간 항체 또는 이소형 일치 비특이적 대조군으로 염색하고 냉장고에서 배양했습니다 2 -8°C에서 30분 동안. 인큐베이션 후, 세포를 원심분리에 의해 세척하고 0.25-0.5 ml 냉 PBS에 재현탁시켰다.

시험된 세포는 CD45-FITC, CD45-PE 범 백혈구 마커, T 세포 마커 CD3-PE CD8-FITC, T 헬퍼 세포 CD4-FITC, CD8-PE, 자연 살해(NK) 세포 마커 CD56에 대한 마우스 단일클론 항체로 염색되었습니다. -PE, 단핵구 마커 CD31-FITC 및 B 세포 마커 CD19-PE.

방출 보상은 CD45-FITC 또는 CD45-PE로 염색된 세포를 포함하는 양성 대조군 튜브에 의해 수행되었습니다. 7-아미노악티노마이신 D로 염색하여 죽은 세포를 배제하고, 염색되지 않은 생존 세포만을 분석하였다. CellQuest Pro 또는 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 샘플당 최소 10,000개의 세포 이벤트를 분석했습니다. 염색된 세포가 1%를 초과하지 않는 이소형 대조군 항체 염색의 백분율을 사용하여 '양성' 염색 게이트를 설정하고 특정 항체 결과로부터 추론했습니다. 결과는 염색된 세포의 백분율로 표시됩니다.