Immunsejtek szubpopulációi A és B influenza betegekben

Háttér:

2009. március végén és április elején egy új, A/H1N1 influenza (népszerű nevén sertésinfluenza) elnevezésű influenzavírus kitörését jelentették Mexikóban, és ezt követően számos országban figyeltek meg eseteket, ami az Egészségügyi Világszervezet nyilatkozatához vezetett. világméretű járvány.

Az A/H1N1 influenza első izraeli esetét 2009. április végén diagnosztizálták a Laniado Kórházban egy Mexikóból hazatérő fiatalembernél.

Az A/H1N1 influenza (sertésinfluenza) viszonylag magas megbetegedést okoz, különösen a fiatal betegek körében. A korai felismerés lehetővé teszi a terápia azonnali megkezdését, ezáltal javítva az eredményeket.

2009-ben, az izraeli H1N1-járvány idején, gyermekgyógyászati ​​osztályunkon kutatást végeztek. A kutatók Sharon et al. (1) összehasonlítottak egy 53 gyermekből álló, influenza A H1N1 vírussal fertőzött csoportot egy 53 gyermekből álló csoporttal, akiknél influenza tünetek jelentkeztek, de a vírusra negatívnak találták. Ez az összehasonlítás a limfocitaszám szignifikáns csökkenését mutatta ki a betegség akut fázisában (1-3. nap), a 7. napon (6-9. napon) megszűnt, valamint a neutrofilek számának csökkenését az 5. napon a magas láz kezdetétől. utólagos felbontás 2-4 nappal később (7-10. nap). Ezt a jelenséget nem figyelték meg a H1N1 vírussal nem fertőzött betegeknél. Hasonló eredményekről számoltak be Cao és társszerzői (2), akik gyermek- és felnőtt betegeknél is megfigyelték. Lewis és munkatársai azt javasolták, hogy a limfopenia főként a T-sejtek, és kisebb mértékben a B-sejtek csökkenése miatt következik be (3). Kimutatták, hogy az A H3N3 influenzára jellemző limfopénia az akut betegség során a T- és B-sejtek számának csökkenése miatt következett be, a CD4:CD8 arány változása nélkül. Ez ellentétben áll Cao et al. (2) akik abnormális CD4:CD8 arányt észleltek az A H1N1-re pozitívak felénél. Nichols és munkatársai (4) által javasolt egyik lehetséges magyarázat az, hogy az influenzával fertőzött betegek korai limfopéniája és későbbi neutropéniája e sejtek fertőzés következményeként a keringésből a fertőzött légutakba való migrációját jelentheti. Kutatásunk célja Az Infuenza A H1N1 által okozott betegség különböző szakaszaiban a limfociták B, T és NK populációinak számszerűsítése.

Vizsgálati módszerek A vizsgálat alanyai olyan gyermekek voltak, akik influenza jeleivel és tüneteivel kerültek kórházba osztályunkra. A résztvevők szülei vagy törvényes gondviselői írásos beleegyezést írtak alá. Az első szakaszban felső légúti tampont vettünk az Infuenza A H1N1 jelenlétének meghatározására (a vírus azonosítása RT-PCR-rel történt). Ezután a limfociták különböző altípusait számszerűsítettük a betegség különböző szakaszaiban. A különböző sejttípusok azonosítása és mennyiségi meghatározása FACS módszerrel történt, a sejtreceptorok a CD31, CD19, CD4, CD3, CD45, CD8, CD56 voltak.

Laboratóriumi technika:

A sejtmarkereket áramlási citometriával értékeltük. A sejtfestést egysejt-szuszpenziókon végeztük előhűtött PBS-sel 5 ml-es FACS-csövekben. A mosási lépéseket 5 perces centrifugálással végeztük, 300 g, 5 °C, 5. fékezés, majd a felülúszót teljesen pipettáztuk, és sejtpelleteket (általában 0,2-1,0 × 106-ot tartalmaztak) sejteket) 100 μl PBS-ben (Ca++ és Mg++ nélkül), 0,5% szarvasmarha szérumalbuminnal kiegészítve újraszuszpendáltuk, specifikus fluorokrómmal konjugált antihumán antitestekkel vagy izotípus-egyeztetett nem specifikus kontrollokkal festettük, és hűtőszekrényben inkubáltuk 2 -8°C-on 30 percig. Inkubálás után a sejteket centrifugálással mostuk, és 0,25-0,5 ml hideg PBS-ben újraszuszpendáltuk.

A vizsgált sejteket egér monoklonális antitestekkel festettük CD45-FITC, CD45-PE egy pan leukocita marker, T-sejt marker CD3-PE CD8-FITC, T-helper sejtek CD4-FITC, CD8-PE, természetes gyilkos (NK) sejt marker CD56 -PE, monocita marker CD31-FITC és B sejt marker CD19-PE.

Az emisszió kompenzációt pozitív kontrollcsövekkel végeztük, amelyek CD45-FITC-vel vagy CD45-PE-vel festett sejteket tartalmaztak; Az elhalt sejteket 7-amino-aktinomicin D-vel való festéssel zártuk ki, csak a nem festett életképes sejteket elemeztük. Mintánként legalább 10 000 sejtes eseményt elemeztek a CellQuest Pro vagy a FlowJo szoftverrel. Az izotípus kontroll antitest festődés százalékos arányát, amely nem haladja meg a festett sejtek 1%-át, a „pozitív” festési kapuk beállításához használtuk, és a specifikus antitest eredményekből következtettek. Az eredményeket a festett sejtek százalékában fejezzük ki.