インフルエンザ A および B 患者の免疫細胞の亜集団

バックグラウンド：

2009 年 3 月下旬から 4 月上旬にかけて、メキシコで A/H1N1 インフルエンザ (一般に豚インフルエンザとして知られる) と呼ばれる新型インフルエンザ ウイルスの発生が報告され、その後、多くの国で症例が観察され、世界保健機関による感染症の宣言につながりました。世界的なパンデミック。

イスラエルで最初のインフルエンザ A/H1N1 の症例は、2009 年 4 月末にラニアド病院でメキシコから帰国した若い男性であると診断されました。

インフルエンザ A/H1N1 (豚インフルエンザ) は、特に若い患者で比較的高い罹患率を示します。 早期発見により迅速な治療開始が可能になり、それによって転帰が改善されます。

2009 年、イスラエルで H1N1 パンデミックが発生した際、小児科で研究が行われました。 研究者シャロン等。 (1) インフルエンザ A H1N1 に感染した 53 人の子供のグループと、インフルエンザの症状を示したがウイルス陰性であることが判明した 53 人の子供のグループを比較しました。 この比較により、疾患の急性期（1～3日目）にリンパ球数が大幅に減少し、7日目（6～9日目）には回復し、高熱の発症から5日目に好中球数が減少したことが示されました。その後の解決は 2 ～ 4 日後 (7 ～ 10 日目) です。 この現象は、H1N1 ウイルスに感染していない患者では観察されませんでした。 同様の結果が Cao と共著者 (2) によって報告され、小児患者と成人患者の両方で観察されました。 Lewis らは、リンパ球減少症は主に T 細胞の減少によるものであり、B 細胞の減少によるものではないことを示唆しました (3)。 急性疾患中のインフルエンザ A H3N3 に典型的なリンパ球減少症は、CD4:CD8 比の変化を伴わない T 細胞と B 細胞の両方の減少によるものであることが示されました。 これは、曹らの発見とは対照的です。 (2) A H1N1 陽性者の半分で異常な CD4:CD8 比を指摘した。 Nichols と共同研究者 (4) によって提案された可能性のある説明の 1 つは、インフルエンザ感染患者における初期のリンパ球減少症とその後の好中球減少症は、感染の結果として循環から感染した気道へのこれらの細胞の移動を表している可能性があるということです。 研究の目的 インフルエンザ A H1N1 によって引き起こされる疾患のさまざまな段階で、リンパ球の B、T、および NK 集団を定量化すること。

研究方法 研究対象は、インフルエンザの兆候と症状で当科に入院している小児である。 参加者の両親または法定後見人は、書面による同意に署名しています。 最初の段階で、インフルエンザ A H1N1 の存在を確認するために上気道の綿棒が採取されました (ウイルスの同定は RT - PCR によって行われました)。 次に、リンパ球のさまざまなサブタイプが、疾患のさまざまな段階で定量化されました。 異なる細胞型の同定と定量化はFACS法によって行われ、マークされた細胞受容体はCD31、CD19、CD4、CD3、CD45、CD8、CD56でした。

実験技術:

細胞マーカーは、フローサイトメトリーによって評価されました。 細胞染色は、5 ml FACS チューブで予冷した PBS を使用して、単一細胞懸濁液で実施しました。 洗浄ステップは、5 分間、300 g、5 °C の遠心分離によって行い、その後、上清を完全にピペットで取り出し、細胞ペレット (通常、0.2 ～ 1.0 x 106 を含む) を取り出しました。 細胞）を 0.5% ウシ血清アルブミンを添加した 100 μl の PBS（Ca++ および Mg++ を含まない）に再懸濁し、特異的な蛍光色素結合抗ヒト抗体またはアイソタイプが一致した非特異的コントロールで染色し、冷蔵庫でインキュベートしました 2 -8℃で30分。 インキュベーション後、細胞を遠心分離によって洗浄し、0.25～0.5mlの冷PBSに再懸濁した。

試験した細胞は、CD45-FITC、CD45-PE 汎白血球マーカー、T 細胞マーカー CD3-PE CD8-FITC、T ヘルパー細胞 CD4-FITC、CD8-PE、ナチュラル キラー (NK) 細胞マーカー CD56 に対するマウス モノクローナル抗体で染色しました。 -PE、単球マーカー CD31-FITC および B 細胞マーカー CD19-PE。

発光補正は、CD45-FITC または CD45-PE で染色された細胞を含む陽性対照チューブによって行われました。 7-アミノアクチノマイシンDで染色することにより死細胞を除外し、染色されていない生存細胞のみを分析した。 CellQuest Pro または FlowJo ソフトウェアを使用して、サンプルあたり少なくとも 10,000 の細胞イベントを分析しました。 １％染色細胞を超えないアイソタイプ対照抗体染色のパーセンテージを用いて「陽性」染色ゲートを設定し、特異的抗体の結果から推定した。 結果は、染色された細胞のパーセンテージとして表されます。