Immuunisolujen alapopulaatiot influenssa A- ja B-potilailla

Tausta:

Maaliskuun lopulla ja huhtikuun alussa 2009 Meksikossa ilmoitettiin uuden influenssaviruksen, joka tunnettiin nimellä A/H1N1-influenssa (tunnetaan yleisesti nimellä sikainfluenssa), puhkeamisesta, ja myöhemmin tapauksia havaittiin monissa maissa, mikä johti Maailman terveysjärjestön julistukseen maailmanlaajuinen pandemia.

Ensimmäinen influenssa A/H1N1-tapaus Israelissa todettiin huhtikuun lopussa 2009 Laniadon sairaalassa Meksikosta palaavalla nuorella miehellä.

Influenssa A/H1N1 (sikainfluenssa) on suhteellisen korkea sairastuvuus erityisesti nuorilla potilailla. Varhainen tunnistaminen mahdollistaisi hoidon nopean aloittamisen, mikä parantaa tuloksia.

Vuonna 2009 Israelin H1N1-pandemian aikana lastenlääketieteen osastollamme tehtiin tutkimus. Tutkijat Sharon et al. (1) ovat vertailleet 53 lapsen ryhmää, jotka saivat influenssa A H1N1 -tartunnan, 53 lapsen ryhmään, joilla oli flunssan oireita, mutta joiden havaittiin olevan negatiivinen virukselle. Tämä vertailu osoitti, että lymfosyyttien määrä väheni merkittävästi taudin akuutin vaiheen aikana (päivät 1-3) parantuessa päivänä 7 (6-9) sekä neutrofiilien määrän vähenemisen päivänä 5 korkean kuumeen alkamisesta. myöhempi ratkaisu 2-4 päivää myöhemmin (päivät 7-10). Tätä ilmiötä ei havaittu potilailla, jotka eivät olleet saaneet H1N1-virustartuntaa. Samanlaisia ​​tuloksia raportoivat Cao ja muut kirjoittajat (2), jotka havaitsivat sen sekä lapsi- että aikuispotilailla. Lewis ym. ehdottivat, että lymfopenia johtuu pääasiassa T-solujen ja vähemmässä määrin B-solujen vähenemisestä (3). Influenssa A H3N3:lle tyypillisen lymfopenian akuutin sairauden aikana osoitettiin johtuvan sekä T- että B-solujen vähenemisestä muuttamatta CD4:CD8-suhdetta. Tämä on ristiriidassa Caon et al. (2) jotka havaitsivat epänormaalin CD4:CD8-suhteen puolella niistä, jotka olivat positiivisia A H1N1:lle. Yksi Nicholsin ja Colaboratorsin (4) esittämistä mahdollisista selityksistä on, että varhainen lymfopenia ja myöhempi neutropenia influenssa-infektoituneilla potilailla voivat edustaa näiden solujen siirtymistä verenkierrosta infektoituneisiin hengitysteihin infektion seurauksena. Tutkimuksemme tavoitteet Määrittää lymfosyyttien B-, T- ja NK-populaatiot Infuenza A H1N1:n aiheuttaman taudin eri vaiheissa.

Tutkimusmenetelmät Tutkimuksen kohteina olivat osastollamme sairaalahoidossa olleet lapset flunssan oireiden vuoksi. Osallistujien vanhemmat tai lailliset huoltajat ovat allekirjoittaneet kirjallisen suostumuksen. Ensimmäisessä vaiheessa otettiin ylempien hengitysteiden vanupuikko Infuenza A H1N1:n esiintymisen määrittämiseksi (viruksen tunnistus tehtiin RT - PCR:llä). Sitten lymfosyyttien eri alatyypit määritettiin taudin eri vaiheissa. Eri solutyyppien tunnistaminen ja kvantifiointi suoritettiin FACS-menetelmällä, solureseptorit merkittiin CD31, CD19, CD4, CD3, CD45, CD8, CD56.

Laboratoriotekniikka:

Solumarkkerit arvioitiin virtaussytometrialla. Soluvärjäys suoritettiin yksittäisille solususpensioille käyttämällä esijäähdytettyä PBS:ää 5 ml:n FACS-putkissa. Pesuvaiheet suoritettiin sentrifugoimalla 5 minuuttia, 300 g, 5 °C, jarruttamalla 5, minkä jälkeen supernatantit pipetoitiin kokonaan pois ja solupelletit (sisältävät tyypillisesti 0,2-1,0 × 106 solut) suspendoitiin uudelleen 100 µl:aan PBS:ää (ilman Ca++:aa ja Mg++:aa), jota oli täydennetty 0,5 %:lla naudan seerumialbumiinia, värjättiin spesifisillä fluorokromikonjugoiduilla anti-ihmisvasta-aineilla tai isotyyppisovitetuilla epäspesifisillä kontrolleilla ja inkuboitiin jääkaapissa 2 -8°C 30 min. Inkuboinnin jälkeen solut pestiin sentrifugoimalla ja suspendoitiin uudelleen 0,25-0,5 ml:aan kylmää PBS:ää.

Testatut solut värjättiin hiiren monoklonaalisilla vasta-aineilla CD45-FITC:lle, CD45-PE:lle yleisleukosyyttimarkkerille, T-solumarkkerille CD3-PE CD8-FITC, T-auttajasoluille CD4-FITC:lle, CD8-PE:lle, Natural Killer (NK) -solumarkkerille CD56. -PE, monosyyttimarkkeri CD31-FITC ja B-solumerkkiaine CD19-PE.

Emission kompensointi suoritettiin positiivisilla kontrolliputkilla, jotka sisälsivät soluja, jotka oli värjätty CD45-FITC:llä tai CD45-PE:llä; Kuolleet solut suljettiin pois värjäämällä 7-aminoaktinomysiini D:llä, vain värjäytymättömät elävät solut analysoitiin. Ainakin 10 000 solutapahtumaa näytettä kohden analysoitiin CellQuest Pro- tai FlowJo-ohjelmistolla. Isotyyppikontrollivasta-ainevärjäytymisen prosenttiosuuksia, jotka eivät ylittäneet 1 % värjäytyneitä soluja, käytettiin "positiivisten" värjäysporttien asettamiseen, ja ne pääteltiin spesifisten vasta-aineiden tuloksista. Tulokset ilmaistaan ​​värjäytyneiden solujen prosenttiosuutena.