원발성 편평 세포 암종에서 분리된 세포 배양에서의 HLA-DR 연구

여러 연구에서 MHC II(주요 조직적합성 복합체 클래스 II) 분자, 특히 HLA-DR(인간 백혈구 항원) 분자의 종양 세포에서의 발현과 질병의 임상 결과 사이의 상관관계가 입증되었습니다. 실제로, IFN-γ의 염증성 자극 하에서 종양 세포는 비전문 APC(항원 제시 세포)로서 기능하는 MHC II 분자를 발현할 수 있게 되는 것이 관찰되었습니다. APC 세포는 T 림프구에 항원을 제시하여 활성화를 유도하는 역할을 하며, 이를 위해서는 반드시 두 가지 신호의 존재가 필요합니다. 첫 번째 신호는 MHC 분자(CD4+ 림프구의 경우 MHC 클래스 II)에 의해 유도되고 두 번째 신호는 보조자극 분자에 의해 유도됩니다. CD80 또는 CD86이 없으면 림프구가 아네르기 상태를 겪습니다.

신생물 세포에서 이들 분자 발현의 역할은 여전히 ​​논란의 여지가 많지만, 다양한 유형의 종양에 대한 여러 연구에서 HLA-DR 발현과 임상 결과 사이의 긍정적인 연관성이 보고되었습니다: 후두 편평 세포 암종, 대장암 , 위암 등이 있습니다. 또한 우리의 연구 "머리와 목의 편평 세포 암종에서 주요 조직 적합성 복합체 클래스 II-HLA-DR의 분자 발현"(ID 2222)에서 연구자들은 편평 세포 암종의 신생물 상피 세포가 머리와 목은 HLA-DR을 표현하는 능력을 획득합니다(데이터는 표시되지 않음, 영향력 지수가 있는 저널에 발표할 과학 작업 진행 중 및 PhD 학생 Chiara Prampolini의 신경 과학 최종 박사 논문). 일부 유형의 종양에서 HLA-DR의 발현은 좋은 예후와 관련된 CD16+/CD11c 대식세포 골수 세포 및 손상된 조직에서 회상되어 면역원성 세포의 형성을 결정하는 T 세포와 같은 면역 세포의 존재와 관련이 있습니다. 따라서 항종양 면역 반응을 지원할 수 있는 미세 환경. 따라서 HLA-DR 분자 발현의 다양성은 종양 부위의 다양한 면역 관련성을 설명하고 종양 진행을 막는 숙주의 능력을 조절합니다.

종양 진행의 근본적인 역할은 점점 더 많은 연구가 집중되고 있는 미세환경입니다. 종양 미세환경은 다양한 세포 집단을 특징으로 하며, 그 중 가장 풍부한 집단은 종양 관련 섬유아세포(CAF)로 나타납니다. CAF는 종양 상황에서 근섬유아세포와 유사한 표현형을 취하고 특정 마커를 나타내는 α-sma, FAP 및 FSP-1의 더 큰 발현으로 정상 섬유아세포와 구별되는 섬유아세포입니다. 비멘틴, 피브로넥틴 및 XI형 콜라겐의 더 큰 발현. 다양한 유형의 종양에 대한 수많은 증거에서 면역억제 역할이 보고되었습니다. 이러한 세포는 시험관 내에서 T 림프구의 증식을 억제하고 세포사멸을 촉진하거나 조절 T 림프구의 표현형을 유도할 수 있기 때문입니다. 및 종양 증식 및 침입, 혈관 신생 및 전이를 촉진하여 예후 악화에 기여할 수 있는 전종양 역할.

많은 연구에서 CAF가 분비하는 요인이 CAF의 기능을 담당하는지에 대한 연구를 진행하고 있습니다. 특히, CAF에 의해 분비되는 많은 인자 중에는 인터루킨 IL-17과 IL-33이 있으며, 이는 입증된 바와 같이 골수 유래 중간엽 세포에서 HLA-DR 분자의 활성화를 유도할 수 있습니다. 따라서 CAF로 대표되는 종양 미세환경의 존재와 관련하여 HLA-DR의 역할을 조사하는 것은 흥미로운 것 같습니다. 연구 목적 연구의 주요 목적

• 두경부의 원발성 편평 세포 암종 환자의 병리학적 및 건강한 조직 샘플로부터 종양 상피 및 암 관련 섬유아세포(CAF) 세포 배양물을 분리합니다. 연구의 2차 목적
• 획득된 세포 배양에서 HLA-DR의 발현을 조사합니다. 등록된 환자 및 등록 방법 표본 크기 계산 표본 크기 계산은 검정력 분석을 사용하여 수행되었으며, 검정력 90%에서 첫 번째 유형 오류는 5%이므로 허용 가능한 것으로 간주되므로 두 번째 유형 오류는 10%입니다. 델타를 결정하기 위해 비교되는 두 그룹(그룹 A: 건강한 조직, 그룹 B: 병리학적 조직) 사이에서 감지되는 최소 허용 가능한 차이와 검사 중인 모집단과 관련된 표준 편차를 결정하기 위해 효과 크기를 계산했습니다. Choen이 제안한 지침.

환자 2020~2021년에 로마 IRCCS Fondazione Policlinico Gemelli의 이비인후과 진료소에 수술 치료를 위해 입원한 두경부의 원발성 편평 세포 암종 환자 4명이 연구에 포함될 예정입니다.

고려된 4가지 사례 중 다음을 사용할 수 있습니다.

• 임상 데이터
• 동의
• 종양 조직 샘플
• 수술 중 외과적으로 제거된 물질에서 채취한 비종양 조직 샘플

사전 동의 연구에 참여하는 피험자는 프로젝트 정보 시트를 읽고 저장된 생물학적 물질 및 임상 데이터를 연구 목적으로 사용하는 것에 대한 사전 동의에 직접 서명하도록 요청됩니다.

유기 물질 연구에 포함된 각 환자에 대해 병리학적 조직과 치료 수술 중에 제거된 건강한 조직 모두에서 생검을 채취하여 대조군으로 사용합니다. 두 생검 모두 배양됩니다.

5. 연구 설계 이 연구는 두 단계로 구성된 비영리 단일 센터입니다. 예상 연구 기간은 12개월이다.

I 단계:

세포 집단의 선택

특정 문화 매체를 통해 선택됩니다:

• 건강한 생검에서 얻은 상피 세포와 종양 생검에서 얻은 종양 상피 세포는 DMEM 고당 + HAM'S F12 1:1, FBS 10%, 페니실린-스트렙토마이신 1%, L-글루타민 1%, 인슐린 10μg/ml, EGF 20ng와 함께 배양하여 유지합니다. /ml, 하이드로코르티손 0.5μg/ml;
• 건강한 생검에서 나온 섬유아세포와 종양 생검에서 나온 종양 관련 섬유아세포(CAF)는 DMEM 고글루코스, FBS 10%, 페니실린-스트렙토마이신 1%, L-글루타민 1%와 함께 배양하여 유지됩니다. 섬유아세포와 CAF는 모두 트립신-EDTA 0.25%에서 일련의 계대를 거쳐 상피 세포와 종양 세포 배양물에서 각각 분리됩니다.

건강한 생검(건강한 상피 세포 및 섬유아세포)의 세포 집단은 음성 대조군으로 사용됩니다.

2상: 종양 상피 세포 및 종양 CAF에서 HLA-DR 발현 평가 HLA-DR 양성은 고전적 보조자극 분자의 존재 평가 외에 상피 마커(사이토케라틴)를 추가한 이중 면역형광 분석을 통해 평가됩니다. (CD80, CD86).

보조자극 분자를 발현하지 않는 HLA-DR+ 종양 세포는 발현을 유도하기 위해 IFN-ɣ 및 LPS를 투여하여 배양에서 자극됩니다.

통계 분석 범주형 데이터(건강한 조직과 병리학적 조직) 간의 비교는 적절한 경우 카이제곱 검정 또는 Fisher의 정확 검정을 통해 수행됩니다. 모든 테스트는 양측 테스트로 진행되며 알파 <0.05는 통계적으로 유의미한 것으로 간주됩니다.