BCG-vaccin bij het verminderen van morbiditeit en mortaliteit bij ouderen in COVID-19-hotspots

Rekruteringsgebied: onder de Lockdown 2.0 is het land ingedeeld in drie belangrijke zones: rood, oranje en groen (26). Deze zones zullen het door de regering aangekondigde clusterinperkingsplan ondersteunen, terwijl de rest van de plaatsen wordt opengesteld.

Groene zone: Plaatsen die tot nu toe nog geen enkele positieve COVID-19-zaak hebben gemeld, zullen volgens het nieuwe plan van de regering worden uitgeroepen tot groene zone. Dit betekent dat bijna 400+ districten van India in aanmerking kunnen komen om te worden aangemerkt als groene zone.

Oranje zone: in de oranje zone wordt mogelijk beperkt openbaar vervoer geopend en zijn er ook vrijstellingen voor personeel van essentiële diensten en landbouw- en oogstactiviteiten voor het lopende seizoen. De oranje zone zal minder dan 15 gevallen van COVID-19 hebben.

Rode zone: een district of cluster dat is uitgeroepen tot rode zone, krijgt te maken met strenge beperkingen waarbij geen of geen activiteit is toegestaan. Typisch begrip is dat elke plaats met meer dan 15 COVID-19-positieve gevallen kan worden verklaard als een rode zone. Onderzoekers zullen voor deze studie de rode en oranje zones van Delhi, Madhya Pradesh, Maharashtra, Gujarat, Tamilnadu, Rajasthan en andere geïnteresseerde staten omvatten.

Wervingsmethoden: deelnemers zouden worden geworven via (i) informatie die in gemeenschapsorganisaties, ziekenhuizen, hogescholen en andere instellingen aan het grote publiek wordt gepresenteerd. (ii) Uit een lijnlijst opgesteld van volwassenen ouder dan 60 jaar op basis van Census-gegevens voor de hotspotgebieden. (iii) Deelnemers zullen ook worden geworven door middel van een advertentie +/- registratieformulier dat formeel is goedgekeurd door de ethische commissie(s) en verspreid of geplaatst in de

1. kranten of andere literatuur voor verspreiding.
2. Via presentaties (bijv. presentaties tijdens lezingen of uitgenodigde seminars). (iv) Er zal een gemeenschapsadviesraad worden opgericht voor deze studie en de leden van deze raad zullen worden geholpen bij de werving voor de studie. Geïnteresseerde personen zullen gedetailleerde informatie over de studie krijgen en de vereisten voor deelname zullen worden verstrekt. Deelnemers krijgen een brochure over het onderzoek en een patiënteninformatieblad. Ze krijgen de gelegenheid om al hun vragen te stellen en om met een lid van het studieteam te praten. Als ze nog steeds geïnteresseerd zijn en bereid zijn om deel te nemen, zullen ze worden uitgenodigd om deel te nemen aan de screening-evaluatieprocedure.

Studieprocedures: Deelnemers die aan de inclusiecriteria voldoen, zullen op een niet-gerandomiseerde manier worden gerekruteerd nadat ze hun toestemming hebben verkregen om aan het onderzoek deel te nemen. Een informatiedocument dat duidelijk de risico's en de voordelen van de deelname aan het onderzoek aangeeft, zal aan elke patiënt worden gegeven voordat de toestemming wordt ondertekend. Met betrekking tot de identificatie van de deelnemers zal een studienummer opeenvolgend worden toegewezen aan de geïncludeerde deelnemers, volgens het bereik van de patiëntnummers die aan elk studiecentrum zijn toegewezen.

Deelnemers zullen bij aanvang worden gezien voor inschrijving, eerste gegevensverzameling (een gedetailleerde medische geschiedenis inclusief h/o eerdere BCG-vaccinatie en bewijs van BCG-vaccinatielitteken dat moet worden genoteerd), X-thorax PA-weergave om PTB uit te sluiten, bloedafname voor antilichaam testen (2 ml) en PCR (nasofaryngeaal uitstrijkje).

In aanmerking komende deelnemers krijgen BCG toegediend op dag 0. Deelnemers worden de eerste 2 maanden wekelijks telefonisch opgevolgd en gevraagd een gestandaardiseerde vragenlijst in te vullen. Maand 1, 3 en 6 zullen persoonlijk worden bezocht, terwijl maand 2 en 5 telefonisch zullen worden afgerond. Deelnemers zouden worden getest op COVID-antilichamen in maand 3 en maand 6. Indien positief, zou ter bevestiging een neus-/keeluitstrijkje worden afgenomen voor PCR-testen. Deelnemers zullen ook worden gevraagd om het studiepersoneel te bellen in geval van bijwerkingen of ziekte. Daarna worden de deelnemers zes maanden lang maandelijks opgevolgd.

Deelnemers krijgen een dagboekkaart (papier), met instructies om in te vullen in geval van bijwerkingen, samen met het 24-uurs telefoonnummer voor noodgevallen om indien nodig contact op te nemen met de dienstdoende onderzoeksarts. Ze zullen worden geïnstrueerd over hoe ze zelf de ernst van deze AE's kunnen beoordelen. Er zal ook ruimte zijn op de dagboekkaart om zelf ongevraagde bijwerkingen te documenteren en of medicatie is gebruikt om de symptomen te verlichten.

Naast bloed worden bij alle deelnemers neus- en keeluitstrijkjes afgenomen.

De qRT-PCR-test wordt overwogen om de positieve/negatieve status van de qRT-PCR bij inschrijving opnieuw te bevestigen. In een subgroep van dit cohort (15% van de steekproef), die toestemming geeft voor immunologische substudie, zal 20 ml bloed worden verzameld bij baseline voor immunologische en biomarkeranalyse. Ze zullen ook extra bloedmonsters (20 ml) leveren op 1, 3 en 6 maanden na vaccinatie voor immunologische en biomarkerstudies.

Bloedafname: onderzoekers verzamelen 2 ml veneus bloed na toestemming van de deelnemers. Onderzoekers verzamelen het monster met behulp van een injectiespuit volgens alle veiligheidsmaatregelen en brengen het monster over in serumscheidingsbuizen. Na voltooiing van de monsterverzameling van alle in aanmerking komende deelnemers, wordt het monster vervoerd naar het dichtstbijzijnde laboratorium van het District Public Health Laboratory (DPHL)/Virus Research and Diagnostic Laboratory Network (VRDLN) in de koelketen. In het laboratorium wordt serum gescheiden en gebruikt voor snelle antilichaamtesten. Detectie van SARS-CoV 2-specifieke antilichamen zal worden uitgevoerd met behulp van een ICMR-gevalideerde SARS-CoV-2-antilichaamtest. De op laterale flow gebaseerde immuunchromatografische test detecteert SARS-CoV 2-specifieke antilichamen (IgG/IgM) met een doorlooptijd van 15-20 minuten. Aanwezigheid van gekleurde banden bij test- en controlelijnen geeft de aanwezigheid van SARS-CoV-2-antilichamen (positief resultaat) in het monster aan. Afwezigheid van een gekleurde band in de testlijn duidt op de afwezigheid van SARS-CoV-2-antilichamen (negatief resultaat).

Immunologische analyse: de primaire variabelen van belang voor de immuunrespons op vaccins zijn het percentage CD4+ en CD8+ T-cellen die IFN-γ, TNF, IL-2, IL-17, IL-22, CD107a, Perforin, Granzyme B en Granulysine alleen of in combinatie als reactie op stimulatie met SARS-Cov-2- en BCG-antigenen. Secundaire interessante variabelen zijn de respons van getrainde monocyten en andere aangeboren immuuncellen, waaronder NK-cellen, NKT-cellen, gd-T-cellen en MAIT-cellen. De respons zal worden gemeten door middel van flowcytometrie in de intracellulaire cytokinekleuring (ICS)-assay. Bloed dat is verzameld voor immunologische studies zal als volgt worden gebruikt: PBMC-isolatie en opslag voor immunologische studies zoals hierboven beschreven; Volbloed in lithiumheparine-microtainer voor het absoluut tellen van bloedcellen door flowcytometrie (deconvolutie voor transcriptomics) en voor interferon-gamma-afgifte-assays; plasma en serum voor oplosbare immuunmediatoren door ELISA en voor totaal en SARS-Cov2-specifiek IgG, IgM en IgA ELISA.

Diagnostische toetsen:

PCR: Moleculaire diagnose van SARS-Cov2 zal worden uitgevoerd met behulp van RT-PCR-kits volgens de ICMR-richtlijnen. Serologie: antilichaam IgG/IgM Covid-19 sneltestkit zal worden gebruikt. X-thorax samen met symptoomscreening: om tuberculose uit te sluiten

Subgroepanalyse

1. De primaire analyse wordt uitgevoerd met het hele cohort
2. Er zal een gestratificeerde analyse worden uitgevoerd voor verschillende leeftijdsgroepen en per risicogroep op basis van comorbiditeit. Hierdoor kan de effectiviteit van vaccins worden beoordeeld in meer homogene subgroepen en kan worden gecontroleerd op het effect van modificatie in verschillende lagen
3. Er zal ook een gestratificeerde analyse worden uitgevoerd voor verschillende geografische spreiding en bezetting
4. Immunologische analyse zal worden uitgevoerd bij een subgroep van individuen (n=200)