Vacuna BCG en la reducción de la morbilidad y la mortalidad en personas mayores en puntos críticos de COVID-19

Área de reclutamiento: bajo el Lockdown 2.0, el país se ha clasificado en tres zonas clave: roja, naranja y verde (26). Estas zonas apoyarán el plan de contención de cúmulos anunciado por el gobierno, mientras se abren el resto de lugares.

Zona Verde: Los lugares que hasta el momento no han reportado ni un solo caso positivo de COVID-19 serán declarados como Zona Verde bajo el nuevo plan del Gobierno. Esto significa que casi más de 400 distritos de India podrían calificar para ser etiquetados como Zona Verde.

Zona naranja: la zona naranja puede ver la apertura del transporte público limitado y también permitir exenciones para el personal de servicios esenciales y la actividad agrícola y de cosecha durante la temporada en curso. Zona naranja tendrá menos de 15 casos de COVID-19.

Zona roja: un distrito o grupo declarado como zona roja verá severas restricciones con cero o ninguna actividad permitida. El entendimiento típico es que cualquier lugar con más de 15 casos positivos de COVID-19 puede declararse como zona roja. Los investigadores incluirán las zonas roja y naranja de Delhi, Madhya Pradesh, Maharashtra, Gujarat, Tamilnadu, Rajasthan y otros estados interesados ​​en este estudio.

Métodos de reclutamiento: Los participantes serían reclutados a través de (i) información presentada en organizaciones comunitarias, hospitales, colegios y otras instituciones al público en general. (ii) A partir de una lista de línea preparada de adultos mayores de 60 años a partir de datos del Censo para las áreas críticas. (iii) Los participantes también serán reclutados mediante el uso de un anuncio +/- formulario de registro aprobado formalmente por los comités de ética y distribuido o publicado en el

1. periódicos u otra literatura para su circulación.
2. A través de presentaciones (por ej. presentaciones en conferencias o seminarios invitados). (iv) Se creará una Junta Asesora Comunitaria para este estudio y se tomará la ayuda de los miembros de esta junta para el reclutamiento para el estudio. A las personas interesadas se les proporcionará información detallada sobre el estudio y se les proporcionarán los requisitos para participar. Los participantes recibirán un folleto sobre el estudio y una hoja de información para el paciente. Tendrán la oportunidad de hacer cualquier pregunta que puedan tener y de hablar con un miembro del equipo de estudio. Si todavía están interesados ​​y dispuestos a participar, serán invitados a participar en el procedimiento de evaluación de selección.

Procedimientos del estudio: los participantes que cumplan con los criterios de inclusión serán reclutados de manera no aleatoria después de obtener su consentimiento para participar en el estudio. Se entregará a cada paciente un documento informativo que indique claramente los riesgos y los beneficios asociados con la participación en el estudio antes de firmar el consentimiento. En cuanto a la identificación de los participantes, se asignará secuencialmente un número de estudio a los participantes incluidos, de acuerdo con el rango de números de pacientes asignados a cada centro de estudio.

Los participantes serán vistos en la línea de base para la inscripción, la recopilación inicial de datos (un historial médico detallado que incluya h/o vacunación previa con BCG y evidencia de la cicatriz de vacunación con BCG para anotar), radiografía de tórax PA para descartar PTB, muestreo de sangre para anticuerpos (2 ml) y PCR (hisopo nasofaríngeo).

A los participantes elegibles se les administrará BCG el día 0. Los participantes serán seguidos semanalmente por teléfono durante los primeros 2 meses y se les pedirá que completen un cuestionario estandarizado. Los meses 1, 3 y 6 se visitarán en persona, mientras que los meses 2 y 5 se completarán por teléfono. A los participantes se les haría la prueba de anticuerpos COVID en el mes 3 y el mes 6. Si es positivo, se recolectará un hisopo nasal/garganta para la prueba de PCR para su confirmación. También se les pedirá a los participantes que llamen al personal del estudio en caso de cualquier reacción adversa o enfermedad. Posteriormente, se realizará un seguimiento mensual de los participantes durante seis meses.

Los participantes recibirán una tarjeta de diario (papel), con instrucciones para completar en caso de eventos adversos, junto con el número de teléfono de emergencia las 24 horas para comunicarse con el médico del estudio de guardia si es necesario. Se les indicará cómo autoevaluar la gravedad de estos EA. También habrá espacio en la tarjeta del diario para autodocumentar AA no solicitados y si se tomaron medicamentos para aliviar los síntomas.

Además de la sangre, se recolectarán hisopos nasofaríngeos de todos los participantes.

Se considerará la prueba qRT-PCR para reconfirmar el estado positivo/negativo de qRT-PCR en el momento de la inscripción. En un subconjunto de esta cohorte (15 % de la muestra), que acepte un subestudio inmunológico, se recolectarán 20 ml de sangre al inicio para el análisis inmunológico y de biomarcadores. También proporcionarán muestras de sangre adicionales (20 ml) a los 1, 3 y 6 meses posteriores a la vacunación para estudios inmunológicos y de biomarcadores.

Recolección de sangre: los investigadores recolectarán 2 ml de sangre venosa después de obtener el consentimiento de los participantes. Los investigadores recolectarán la muestra usando una jeringa siguiendo todas las precauciones de seguridad y transferirán la muestra a tubos separadores de suero. Después de completar la recolección de muestras de todos los participantes elegibles, la muestra se transportará al laboratorio de cadena de frío del Laboratorio de Salud Pública del Distrito (DPHL)/Red de Laboratorios de Investigación y Diagnóstico de Virus (VRDLN) más cercano. En el laboratorio, el suero se separará y se utilizará para pruebas rápidas de anticuerpos. La detección de anticuerpos específicos contra el SARS-CoV 2 se realizará mediante una prueba de anticuerpos contra el SARS-CoV-2 validada por ICMR. La prueba inmunocromatográfica basada en flujo lateral detecta anticuerpos específicos contra el SARS-CoV 2 (IgG/IgM) con un tiempo de respuesta de 15 a 20 minutos. La presencia de bandas de colores en las líneas de prueba y control indicará la presencia de anticuerpos contra el SARS-CoV-2 (resultado positivo) en la muestra. La ausencia de una banda de color en la línea de prueba indicará la ausencia de anticuerpos contra el SARS-CoV-2 (resultado negativo).

Análisis inmunológico: Las principales variables de interés de la respuesta inmune a las vacunas serán el porcentaje de células T CD4+ y CD8+ que expresan IFN-γ, TNF, IL-2, IL-17, IL-22, CD107a, Perforina, Granzima B y Granulisina sola o en combinación en respuesta a la estimulación con antígenos SARS-Cov-2 y BCG. Las variables secundarias de interés serían la respuesta de los monocitos entrenados y otras células inmunitarias innatas, incluidas las células NK, las células NKT, las células T gd y las células MAIT. La respuesta se medirá mediante citometría de flujo en el ensayo de tinción de citoquinas intracelulares (ICS). La sangre recolectada para estudios inmunológicos se utilizará de la siguiente manera: aislamiento y almacenamiento de PBMC para estudios inmunológicos descritos anteriormente; Sangre completa en microtainer de heparina de litio para recuento absoluto de células sanguíneas mediante citometría de flujo (desconvolución para transcriptómica) y para ensayos de liberación de interferón gamma; plasma y suero para mediadores inmunes solubles por ELISA y para IgG, IgM e IgA total y específica de SARS-Cov2 ELISA.

Pruebas de diagnóstico:

PCR: el diagnóstico molecular de SARS-Cov2 se realizará mediante el uso de kits de RT-PCR de acuerdo con las pautas de ICMR. Serología: Se utilizará el kit de prueba rápida de anticuerpos IgG/IgM Covid-19. Radiografía de tórax junto con detección de síntomas: para descartar tuberculosis

Análisis de subgrupos

1. El análisis principal se realizará utilizando toda la cohorte.
2. Se realizará un análisis estratificado para varios grupos de edad y por grupos de riesgo en función de la comorbilidad. Esto permitirá evaluar la eficacia de la vacuna en subgrupos más homogéneos y verificar el efecto de la modificación en todos los estratos.
3. También se realizará un análisis estratificado para varias distribuciones geográficas y ocupación.
4. El análisis inmunológico se realizará en un subconjunto de individuos (n=200)