Pathofysiologische basis van Hidradenitis Suppurativa

HS-patiënten zouden aan het onderzoek deelnemen, verdeeld in drie groepen, afhankelijk van het stadium van hidradenitis.

De eerste en tweede groep zouden patiënten in stadium 2-3 omvatten (volgens de Hurley-schaal) bij wie een gedeeltelijke of volledige klinische remissie optrad nadat biologische therapie en chirurgische behandeling waren uitgevoerd volgens de richtlijnen.

In de derde (controle)groep zouden we de monsters classificeren die waren verkregen bij de bovengenoemde patiënten, van wie we een monster van "normale" huid van 1 x 1 cm zouden nemen.

Met de standaardprocedure van pathohistologische weefselverwerking na weefselfixatie met 10% gebufferde formaline en inbedding in paraffine, zullen weefselcoupes gekleurd met standaard hematoxyline- en eosine (HE)-kleuring worden geanalyseerd met behulp van een lichtmicroscoop op een zodanige manier dat het type en de hoeveelheid ontstekingsinfiltraat, de hoeveelheid granulatieweefsel en fibrose en epitheliale veranderingen van het oppervlak en folliculair epitheel en ingedeeld naar intensiteit in 3 categorieën.

De genoemde weefselmonsters gefixeerd in formaline en ingebed in paraffine zullen worden gebruikt om weefselcoupes te maken voor immunohistochemische kleuring. De expressie van inflammatoire cytokinen zal worden geanalyseerd met behulp van de indirecte peroxidase-immunohistochemische methode. Primaire en secundaire antilichamen zullen worden gebruikt voor immunohistochemische analyses. De voorbereide weefselcoupes worden van paraffine ontdaan in een xyleenoplossing en vervolgens gedehydrateerd in een reeks ethylalcoholen met afnemende concentraties (100%, 96% en 75%). Vervolgens wordt het driemaal gewassen met PBS-oplossing en in citraatbuffer (10 mM, pH 6,0). Secties worden vervolgens bij kamertemperatuur gewassen met Triton X 100-oplossing (0,3% in PBS). Daarna wordt endogene peroxidase gedurende 30 minuten geïnactiveerd met behulp van waterstofperoxide in methanol (0,3%). Na het wassen van de weefselcoupes met PBS-oplossing wordt gedurende 60 minuten normaal serum (10%) toegevoegd. Na het wassen van de weefselcoupes in PBS-oplossing (pH 7,4) wordt afhankelijk van het primaire antilichaam het secundaire antilichaam toegevoegd. Weefselrehydratatie zal plaatsvinden in ethylalcoholen met toenemende concentraties (75%, 96% en 100%). Na klaring met xylol wordt het preparaat in entalan opgenomen.

De intensiteit van de immunohistochemische kleuring zal worden geanalyseerd met behulp van het ImageJ-computerprogramma op basis van de kleurintensiteit.