Zakażenie malarią diagnozowane za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) jako sposób oceny potencjalnych szczepionek przeciwko malarii przed erytrocytami

Cel

Podstawowym celem pracy było ustalenie, czy bardzo czuła technika PCR, zdolna do wykrywania pasożytów malarii w małych zagęszczeniach, może być wykorzystana jako ekonomiczna metoda przeprowadzenia wstępnej oceny terenowej preerytrocytarnych szczepionek przeciwko malarii. Drugim celem było ustalenie, czy intensywne pobieranie krwi, którego wymaga ta metoda, byłoby dopuszczalne.

Zakres badań

Badanie to prowadzono od czerwca do października 2004 r., kiedy częstość występowania malarii w Gambii jest najwyższa. Ochotników rekrutowano z 9 wiosek położonych na wschód od Farafenni, miasta położonego 200 km na wschód od stolicy kraju Bandżul. Malaria ma charakter wysoce sezonowy na tym obszarze, a wskaźnik zaszczepienia entomologicznego wynosi od 10 do 50 zakaźnych ukąszeń rocznie.

Badana populacja

Zdrowych ochotników w wieku od 15 do 45 lat przebadano w dwóch ośrodkach pod kątem kwalifikacji do udziału w badaniu. Badanie przesiewowe obejmowało dokładne badanie przedmiotowe oraz badania krwi do badań hematologicznych (morfologia krwi, objętość upakowanych krwinek [PCV]), nerek (stężenie kreatyniny w osoczu) i wątroby (aminotransferaza alaninowa) oraz testów na obecność wirusa HIV 1 i 2 za pomocą testu ELISA . Test niedoboru dehydrogenazy glukozo-6-fosforanowej (G6PD) przeprowadzono ze względu na ryzyko związane z podawaniem badanych leków Primaquine i Lapdap ochotnikom z niedoborem G6PD. Kryteria wyłączenia obejmowały PCV < 30%, podwyższone stężenie kreatyniny w osoczu (> 130 mikromoli/litr) lub ALT (> 42 j.m./litr), niedobór G6PD, równoczesny udział w innym badaniu klinicznym, przetoczenie krwi w miesiącu poprzedzającym szczepienie, przebyte eksperymentalne szczepienie przeciw malarii, podanie innej szczepionki w ciągu 2 tygodni po szczepieniu, alergia na poprzednie szczepienie lub na sulfadoksynę/pirymetaminę, splenektomia w wywiadzie i jakiekolwiek leczenie lekami immunosupresyjnymi.

Procedura badania

Kwalifikujący się ochotnicy zostali włączeni do badania po uzyskaniu pisemnej, świadomej zgody. Wszyscy kwalifikujący się wolontariusze otrzymali unikalny numer oraz kartę identyfikacyjną ze zdjęciem. Ochotnicy zostali losowo podzieleni na trzy grupy, które otrzymały dwie dawki FP9 ME-TRAP 5 x 10^7 pfu, a następnie pojedynczą dawkę 1 x 10^8 pfu MVA ME-TRAP (grupa szczepionki przeciw malarii) lub 3 dawki szczepionki przeciwko wściekliźnie ( grupy Fansidar i wścieklizny). Wszystkie szczepionki były podawane w odstępie 4 tygodni i były podawane śródskórnie. Po szczepieniu wszystkich ochotników obserwowano przez 1 godzinę iw razie potrzeby podawano im lek przeciwgorączkowy (paracetamol). Ponadto pracownicy terenowi dokonywali wizyt domowych w dniach 1, 2, 7 i 28 po każdym szczepieniu w celu odnotowania zdarzeń niepożądanych przy użyciu standardowej karty dziennika. Wszyscy ochotnicy otrzymali pojedynczą dawkę Primachiny (30 mg) na 7 dni przed ostatnią dawką szczepienia jako radykalne lekarstwo na gametocyty oraz 3-dniową kurację krótkodziałających leków przeciwmalarycznych, Lapdap i Artesunate w połączeniu, począwszy od dnia ostatniej szczepienie w celu usunięcia wszelkich bezpłciowych form pasożyta przed okresem obserwacji. Dodatkowo ochotnicy z grupy Fansidar otrzymywali długo działający lek przeciwmalaryczny i oczekiwano, że pozostaną ujemni w teście PCR przez cały okres obserwacji. Ochotników obserwowano intensywnie przez 28 dni, począwszy od 7 dni po ostatnim szczepieniu. Okres obserwacji został zaplanowany tak, aby odpowiadał okresowi wysokiej transmisji malarii. Obserwacja polegała na codziennym nakłuwaniu palca w celu uzyskania 0,5 ml krwi w mikrotainerze do analizy PCR i duplikatu rozmazu krwi do oceny pasożytów malarii. Personel laboratorium, który przeprowadzał testy immunologiczne i analizę PCR, był ślepy na przydział grup ochotników do czasu zatwierdzenia planu analizy przez Radę Monitorowania Bezpieczeństwa Danych (DSMB).

Wielkość próbki

W oparciu o względy praktyczne i statystyczne badacze zaproponowali przyjęcie 40 ochotników na grupę (w sumie 120). Pozwalając na stały wskaźnik rezygnacji podczas obserwacji wynoszący łącznie 20% pacjentów do końca badania, badanie ma co najmniej 80% mocy do wykrycia różnicy w czasie do zakażenia między grupami szczepionki przeciw malarii i wścieklizny , jeśli skuteczność szczepionki wynosi co najmniej 60%, a co najmniej 70% ochotników z grupy kontrolnej rozwinie wykrytą parazytemię podczas badania.

Rada Monitorowania Bezpieczeństwa Danych (DSMB)

Powołano DSMB w celu nadzorowania przebiegu badania i zatwierdzania planu analitycznego przed ujawnieniem personelu laboratorium. Badanie przeprowadzono zgodnie z wytycznymi Dobrej Praktyki Klinicznej ICH i kierowano się przepisami Medical Research Council dotyczącymi prowadzenia badań klinicznych.