Skuteczność szczepionki polisacharydowej przeciwko pneumokokom u rekrutów wojskowych

Uczestnicy badania. Biorąc pod uwagę ich udokumentowane wysokie wskaźniki chorób układu oddechowego, do udziału wybrano amerykańskich stażystów wojskowych. Liczebność próby 166 744 osobolat obliczono na podstawie następujących założeń: 12% wyniszczenia ze szkolenia wojskowego, odsetek klinicznych ataków zapalenia płuc wynoszący 11 przypadków na 1000 osobolat, 20% przechwyconych zapaleń płuc wywołanych przez Sp, 90% przechwyconych Sp. zapalenie płuc wywołane przez szczep Sp objęty szczepionką i 70% skuteczność szczepionki.

Rejestracja i kontynuacja. Badanie to zostało zatwierdzone przez wiele instytucjonalnych komisji rewizyjnych Departamentu Obrony (DoD). Korzystając z procesu świadomej zgody, rekruci szkolenia podstawowego w 5 ośrodkach szkolenia rekrutów (w Południowej Karolinie, Missouri, Illinois i Kalifornii) zostali zaproszeni do udziału w pierwszym tygodniu szkolenia. Badanie przesiewowe ciąży przeprowadzono u wszystkich kobiet, a te z pozytywnym wynikiem nie zostały włączone. Kryteria wykluczenia obejmowały wcześniejsze otrzymanie 23-walentnej szczepionki przeciwko pneumokokom w ciągu ostatnich 5 lat lub stan chorobowy, który wymagał lub wykluczał szczepienie przeciwko pneumokokom. Uczestnicy badania wypełnili kwestionariusz badawczy i otrzymali wstępnie opakowaną, zaślepioną i losową iniekcję zawierającą albo 23-walentną szczepionkę przeciw pneumokokom (Wyeth Pharmaceuticals lub Merck & Company, Inc.) albo sól fizjologiczną w stosunku 1:1. Badane wstrzyknięcia podawano w tym samym czasie, co inne szczepienia rekrutów w trakcie przetwarzania, które mogły obejmować szczepionki przeciwko polio, odrze, śwince, różyczce, ospie wietrznej, tężcowi, błonicy, wirusowi zapalenia wątroby typu A, wirusowi zapalenia wątroby typu B, chorobie meningokokowej (A/C /Y/W135) i grypy. Na koniec szkolenia rekrutów przeprowadzono kwestionariusz, aby uchwycić symptomy i oznaki chorób, które mogły zostać przeoczone podczas aktywnego i biernego nadzoru.

Ponieważ rejestracja trwała dłużej niż dwa lata, wkład osób zapisanych jako pierwszy był większy niż tych zapisanych pod koniec okresu próbnego. Pierwotnie planowany okres nadzoru wynosił 1,7 roku. Okres ten został później przedłużony do 6,7 lat od włączenia pierwszego uczestnika, w celu dalszego monitorowania wpływu w tej dużej podwójnie ślepej próbie.

Kolekcja próbek. Podczas aktywnego okresu obserwacji uczestnicy badania z podejrzeniem zapalenia płuc zostali zidentyfikowani przez lekarza prowadzącego. Personel badawczy otrzymał od uczestników trzy wymazy z gardła, posiewy krwi (tlenowe i beztlenowe), próbkę plwociny (jeśli można ją wyprodukować) oraz ostre próbki surowicy. Próbowano również uchwycić próbkę surowicy rekonwalescencji 2 tygodnie po ostrej prezentacji we wszystkich przypadkach zapalenia płuc potwierdzonych radiologicznie. Próby te nie zawsze kończyły się sukcesem. Barierami były: zwolnienie stażystów ze służby wojskowej, trudność w dotarciu do poborowych w czasie ćwiczeń polowych, absolwenci i przechodzenie na nowe stanowiska służbowe.

Metody laboratoryjne. Próbki pobrane od uczestników badania zostały zbadane przy użyciu klasycznych, molekularnych i serologicznych metod laboratoryjnych w Naval Health Research Center (NHRC) Respiratory Disease Laboratory, akredytowanym laboratorium College of American Pathologist (CAP).

NHRC wyizolowało adenowirusy, grypę, paragrypę i syncytialny wirus oddechowy z wymazów z gardła za pomocą fluorescencyjnych testów na przeciwciała antygenowe. Izolaty adenowirusów i grypy typowano przy użyciu standardowych technik identyfikacji wirusów.

Próbki plwociny inokulowano do hodowli Sp przy użyciu standardowych technik. Gdy zidentyfikowano gatunki Sp, przeprowadzono serotypowanie otoczki i oceniono standardową wrażliwość na środki przeciwdrobnoustrojowe. Sparowane surowice ostre i rekonwalescencji oceniono pod kątem mian IgM i IgG na pneumolizynę. Surowice testowano za pomocą enzymatycznego testu immunologicznego, stosując procedurę taką, jak opisali Kalin, M, i in.

W celu zbadania reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) Chlamydophila pneumoniae pobrano wymazy z gardła od pacjentów, u których zdiagnozowano zapalenie płuc, natychmiast umieszczono w pożywce transportowej Chlamydia i przetransportowano na lodzie. Wymazy z gardła stosowano w bezpośredniej metodzie PCR, takiej jak procedura opisana przez Campbell i in. Produkty amplifikacji analizowano za pomocą elektroforezy w 1,5% żelu agarozowym standardowymi metodami. Przygotowanie próbek, amplifikację PCR i analizę produktów amplifikacji przeprowadzono w oddzielnych pomieszczeniach.

Aby ocenić M. pneumoniae, pobrano wymaz z gardła i natychmiast umieszczono go w 2,0 ml pożywki transportowej M. pneumoniae (bulion SP-4). Hodowlę, podhodowlę i testy molekularne przeprowadzono zgodnie z wcześniej opublikowanymi protokołami.

Przechwytywanie wyników choroby. Miary wyników obejmowały zapalenie płuc z dowolnej przyczyny, chorobę układu oddechowego z dowolnej przyczyny, kliniczne zapalenie płuc podczas szkolenia rekrutów (potwierdzone radiologicznie podczas okresu szkolenia rekrutów) lub dni utracone ze szkolenia. Aktywny nadzór prowadzono w przypadku potwierdzonych radiologicznie zapaleń płuc tylko w okresie szkolenia rekrutów (piechota morska - 12 tygodni, marynarka wojenna - 8 tygodni, armia - 9 tygodni). Bierne elektroniczne monitorowanie wizyt w opiece zdrowotnej pod kątem wyników innych niż szkolenie rekrutów kliniczne zapalenie płuc miało miejsce podczas szkolenia rekrutów i na kolejnych posterunkach dyżurnych przy użyciu kompleksowych elektronicznych baz danych Departamentu Obrony dotyczących wizyt ambulatoryjnych (SADR), wizyt szpitalnych (SIDR) i spotkań w cywilnych obiekty rozliczane na rzecz Departamentu Obrony (HCSR). Kody ICD-9-CM od 480 do -486 i 487 były monitorowane pod kątem tych wyników przez cały okres badania. Przypadki zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych (kody ICD-9-CM od 320 do -320.2, 320.9 i 322.9) również zostały przechwycone przez te elektroniczne bazy danych.

Analiza statystyczna. Po opisowym badaniu cech populacji przeprowadzono analizy jednowymiarowe, aby ocenić znaczenie powiązań między zmiennymi demograficznymi a ostrą infekcją dróg oddechowych, zapaleniem płuc i potwierdzonym radiologicznie zapaleniem płuc.

Czas aktywnego nadzoru liczono od daty rejestracji uczestnika do przewidywanego ukończenia szkolenia lub diagnozy z potwierdzonym radiologicznie zapaleniem płuc. Obserwację bierną obliczano od daty rejestracji do 01 czerwca 2007 r., rozpoznania zapalenia płuc lub ostrej infekcji dróg oddechowych lub oddzielenia od służby czynnej, w zależności od tego, co nastąpiło wcześniej.

Za pomocą diagnostyki regresji zbadano współliniowość między zmiennymi. Modelowanie proporcjonalnego ryzyka Coxa w czasie do zdarzenia zostało wykorzystane do oceny wyników wśród uczestników badania, przy jednoczesnym dostosowaniu różnic w charakterystyce populacji między ramionami leczenia i uwzględnieniu różnych dat rejestracji oraz aktywnych i pasywnych okresów obserwacji. Nasycony model regresji Coxa został zredukowany za pomocą ręcznej stopniowej eliminacji wstecznej, usuwając te zmienne, które były nieistotne na poziomie α = 0,05 i nie zakłócając innych miar asocjacji. Dodatkowo wykreślono skumulowane prawdopodobieństwa wyników od rejestracji do końca okresów obserwacji. Modelowanie statystyczne w celu uzyskania skorygowanych współczynników ryzyka (HR) i powiązanych 95% przedziałów ufności (CI) przeprowadzono przy użyciu oprogramowania Statistical Analysis System (SAS) (wersja 9.0, SAS Institute, Inc., Cary, Karolina Północna).

Surowe miary skuteczności szczepionki dla każdego wyniku zostały obliczone dla wszystkich uczestników i dla każdej gałęzi służby przy użyciu oszacowania 1-względne ryzyko x 100%.

Dni utracone ze szkolenia oszacowano za pomocą ankiety przeprowadzonej pod koniec szkolenia na grupie 71 692 uczestników badania. Różnice między ramionami leczenia oceniano za pomocą ANOVA.