TROPOnin-FRAGmentatie in onderzoek naar myocardletsel (Tropo-Fragm)

Moderne cardiale troponine T (cTnT) -testen zijn zeer gevoelig bij het diagnosticeren van AMI en myocardiale schade. Boezemfibrilleren en veel niet-cardiale aandoeningen en zelfs zware inspanning worden in verband gebracht met verhoogde cTnT-niveaus die problematisch zijn voor clinici en kunnen leiden tot overbodig gebruik van diagnostische coronaire angiografie of "overdiagnose" van ACS bij het onderzoek op de eerste hulp.

Het cardiale troponine (cTn)-complex maakt deel uit van de dunne filamenten van het myocardium. Een klein deel (ongeveer 5% van het totale gehalte) van troponinen is cytosolisch. Deze kleinere cytosolische fragmenten kunnen gemakkelijker celmembranen passeren die om de een of andere reden lek zijn geraakt maar niet onomkeerbaar beschadigd zijn. Alleen cytoplasmatische vormen van troponine zijn aanwezig in de subcellulaire blaasjes die lyseren bij vroege afgifte van cTn in de bloedsomloop. Bleb-vorming kan verklaren hoe troponine in het bloed kan verschijnen in afwezigheid van celnecrose. Nog steeds worden veel aspecten van hun intramyocardiale afbraak, hun weefselafgifte en hun afbraak binnen en eliminatie uit de menselijke circulatie nog steeds onvolledig begrepen.

In de vroege uren van AMI wordt troponine in zijn volledige complex aangetroffen, maar het gecomplexeerde cTnT degradeert in een tijdsafhankelijk patroon na de eerste uren. Troponinefragmenten met een klein molecuulgewicht afkomstig uit het cytoplasma kunnen onder verschillende omstandigheden door lekkende celmembranen gaan die niet volledig beschadigd zijn zonder onomkeerbare myocardiale celnecrose.

Commerciële cTnT-test detecteert al deze fragmenten en kan dus leiden tot een valse diagnose van AMI. Op dit moment is er beperkte informatie op basis van kleine onderzoeken met gecompliceerde gelfiltratiechromatografie en Western-blotting die cTnT-fragmentatie aantonen in latere fasen van AMI en bij nierfalen. Deze tijdrovende analysemethoden zijn echter niet geschikt voor klinische doeleinden op de spoedeisende hulp.

ANALYTISCHE METHODEN In deze studie testen we een nieuwe gevoelige tijdsopgeloste immunofluorometrische assay, die is ontwikkeld op de biotechnologie-eenheid van de afdeling Biochemie, Universiteit van Turku, die ons in staat stelt om cTnT te meten van bloedmonsters in zijn intacte of slechts licht gefragmenteerde vorm. . We kunnen dus de sterk gefragmenteerde korte vormen van cTnT uitsluiten van de analyse. Deze selectiviteit kan worden bereikt met specifieke capture- en tracer-antilichamen die zich binden aan zorgvuldig gekozen epitopen die zich dichter bij de tegenovergestelde uiteinden van het cTnT-molecuul bevinden. Bij de assay wordt een van de antilichamen aan een oppervlak gehecht en fungeert als een antigeen-vangend antilichaam. Het capture-antigeen-paar kan worden gedetecteerd met tracer-antilichaam, waardoor het capture-antigeen-tracer-complex wordt gevormd. In ons geval is dit tracer-antilichaam gelabeld met europiumchelaten die gevoelige detectie bieden door tijdsopgeloste fluorometrie.

Het doel van het Tropo-Fragment-onderzoek is om het beschreven voorlopige assay-formaat te gebruiken in de klinische onderzoeken om te evalueren:

• TnT-fragmentatie en het tijdsverloop ervan in STEMI en NSTEMI
• TnT-fragmentatie bij nierfalen, sepsis, zware inspanning, beroerte, atriumfibrilleren, takotsubo, myocarditis en gezonde proefpersonen