Evolusjon av metabolsk og immun dysfunksjon ved in-transit melanom

Denne studien vil bruke en ny plattform for å profilere pasientbiopsier, inkludert mikroskopisk analyse, flowcytometri for fenotyping, metabolske og funksjonelle analyser, og metabolsk profilering ved Seahorse-analyse for å forstå den unike etiologien til ITM-er for å forstå hvordan individuelle melanomlesjoner metabolsk og immunologisk utvikler seg når de beveger seg bort fra det primære tumorstedet. En stor mengde translasjonsdata kan utledes fra individuelle vevsbiopsier. Denne studien vil bruke denne plattformen til omfattende evaluering av 2-5 (melanom) in-transit metastaser (ITM) per pasient. Det antas at når ITM-er beveger seg bort fra det primære melanomstedet, vil hver enkelt huse progressivt hypermetabolske tumorceller og et tøffere mikromiljø. Hver ITM-stasjon vil bli dypt profilert ved bruk av metabolske analyser, flowcytometri og svært multipleksert immunfluorescensmikroskopi, inkludert for å undersøke de metabolske profilene til tumor og immunsystem i individuelle melanom-ITMer, og for å bestemme tumor:immun interaksjon i sammenheng med hypoksi ved å bruke høydimensjonal bildebehandling. Ved å bruke høykapasitets sekvenseringsteknologier vil det bestemme hvordan tumor- og immunceller samhandler og utvikler seg i løpet av transitt i ITM-er (ettersom disse cellene blir mer metabolsk og immunologisk undertrykkende når de migrerer videre fra det primære stedet). Den klonale evolusjonsanalysen av tumorceller gjennom og pimonidazol-aktivert enkeltcelle-RNA-sekvensering vil bli brukt til å identifisere transkriptomiske endringer i tumor-, immun- og stromaceller korrelert med hypoksieksponering.