Badanie HIV i infekcji pasożytniczych (HAPI). (HAPI)

Jest to prospektywne badanie, w którym uczestnicy zostaną zapisani do ambulatoryjnych klinik HIV związanych z centralnym szpitalem Kamuzu w Lilongwe w Malawi, gdzie pod opieką znajduje się ponad 25 000 pacjentów, z ponad 90% supresją wirusów na ART.

Każdy pacjent spełniający kryteria włączenia i nieposiadający kryteriów wykluczenia, który obecnie otrzymuje opiekę w klinikach stowarzyszonych ze Szpitalem Centralnym Kamuzu lub Szpitalem Bwaila, będzie uprawniony do udziału w tym badaniu. Po podpisaniu świadomej zgody zostanie pobrane łącznie 10 ml krwi, 20 g kału i 20 ml próbki moczu. Każdy uczestnik otrzyma serię pytań. Z karty medycznej uczestnika zostaną zebrane zmienne kliniczne, w tym wiek, płeć, liczba limfocytów T CD4+ i CD4%.

Próbki kału zostaną poddane badaniu mikroskopowemu w lokalnym laboratorium UNC Project Malawi, a pozostała próbka będzie przechowywana w temperaturze -80 stopni Celsjusza (C) do czasu przetransportowania do Laboratorium Parazytologii Narodowej Szkoły Medycyny Tropikalnej Baylor College of Medicine w Houston, Texas w celu wykrycia 9 różnych pasożytów i ilościowego określenia obciążenia pasożytami metodą qPCR w kale. Próbki krwi zostaną pobrane do probówek do pobierania krwi z EDTA i odwirowane. Osocze zostanie zamrożone w temperaturze -80 stopni C w UNC Project Malawi do czasu transportu do National School of Tropical Medicine Baylor College of Medicine w celu określenia poziomów aktywacji immunologicznej i upośledzenia błony śluzowej jelit (sCD14, sCD163 i I-FABP) oraz Strongyloides stercoralis IgG. Próbki moczu zostaną ocenione pod mikroskopem w poszukiwaniu Schistosoma haematobium w laboratorium UNC Project Malawi.

Wielorównoległy ilościowy PCR w czasie rzeczywistym (qPCR) przeprowadzony na kale będzie oceniał 9 różnych pasożytów, w tym Ascaris lumbricoides, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Schistosoma mansonii, Strongyloides stercoralis, Taenia solium, Trichuris trichiura, Entamoeba histolytica i Giardia lamblia.

Skontaktujemy się z uczestnikami, u których wynik testu na obecność pasożytów będzie pozytywny, a odpowiednie leczenie zostanie zastosowane zgodnie z lokalnymi standardami opieki. Albendazol w pojedynczej dawce 400 mg zostanie podany w przypadku infekcji Ascaris lumbricoides, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Trichuris trichiura. W przypadku Strongyloides stercoralis podaje się albendazol w dawce 400 mg dziennie przez 5 dni. Pojedyncza dawka prazikwantelu 40 mg/kg zostanie podana w przypadku zakażenia Schistosoma mansoni i Schistosoma haematobium. Pojedyncza dawka prazikwantelu 10 mg/kg zostanie podana w celu leczenia infekcji jelitowej Taenia solium. Metronidazol 500mg dwa razy dziennie x5 dni dla Giardia lamblia i 500mg trzy razy dziennie x7 dni dla Entamoeba histolytica.

Wizyty kontrolne zostaną przeprowadzone 8-12 tygodni po leczeniu i będą obejmowały ponowne pobranie próbek krwi i kału.

Zespół badawczy przewiduje przyjęcie 100 pacjentów w okresie 8-12 tygodni. Przy szacunkowej częstości występowania pasożytów jelitowych na poziomie 30%, zespół badawczy przewiduje 30 przypadków i 70 kontroli. Uczestnicy, u których stwierdzono pozytywny wynik zarówno podczas wizyty początkowej, jak i kontrolnej, zostaną uznani za ponownie zakażonych, a nie za niepowodzenie leczenia. Zostaną one uwzględnione w analizie częstości występowania, ale zmiana markerów aktywacji immunologicznej nie będzie mierzona w tej grupie, ponieważ nie ustalono klirensu pasożytów. Wykorzystując test t-Studenta dla niesparowanych grup do porównania średnich wartości biomarkerów między badanymi grupami, będzie 80% mocy do wykrycia różnicy 0,434 x106 pg/ml, 0,56 mg/l i 598 pg/ml między grupami dla biomarkerów sCD14, sCD163 i I-FABP, odpowiednio, z wielkościami efektu w zakresie wcześniejszych badań. Stosując sparowane testy t do porównania poziomów biomarkerów przed i po leczeniu, będzie 80% moc wykrywania zmian po leczeniu wynoszących 0,317 x106/ml, 0,41 mg/l i 435 pg/ml w sCD14, CD163 i odpowiednio I-FABP.

Zostaną zarejestrowane zmienne kliniczne, w tym wiek, płeć i ostatnia liczba komórek CD4. Kliniczne predyktory zakażenia pasożytniczego (np. CD4%) zostaną określone przy użyciu wielowymiarowej regresji logistycznej. Jednozmienna regresja liniowa zostanie wykorzystana do określenia powiązań między markerami aktywacji immunologicznej (ciągła zmienna wynikowa) a predyktorami, w tym powyższymi zmiennymi klinicznymi, jak również obecnością wielu infekcji pasożytniczych.