Vliv farmakogenetiky na plazmatickou hladinu a odezvu imatinibu

Úvod:

Chronická myeloidní leukémie (CML) je myeloproliferativní onemocnění s incidencí jeden až dva případy na 100 000 dospělých. Tvoří přibližně 15 % nově diagnostikovaných případů leukémie u dospělých.

Zavedení imatinibu, inhibitoru tyrozinkinázy (TKI), na počátku 21. století je považováno za průlom v léčbě CML. U naprosté většiny pacientů vyvolává léčba imatinibem cytogenetické a dokonce molekulární odpovědi s velmi nízkou nebo nedetekovatelnou hladinou transkriptů BCR-ABL1. Tito pacienti zůstávají bez progrese do blastické krize. Imatinib však nemoc neléčí, protože není schopen eradikovat leukemické kmenové buňky, které proto představují potenciální rezervoár pro relaps.

Přes jeho účinnost a příznivý farmakokinetický profil existuje velká interindividuální variabilita plazmatických koncentrací imatinibu, která může vést k selhání léčby a progresi onemocnění.

Polymorfismy v genech souvisejících s absorpcí, distribucí, metabolismem a vylučováním imatinibu mohou ovlivnit biologickou dostupnost a následně odpověď na lék.

Cíl studie:

Cílem studie je prozkoumat možný účinek genetických polymorfismů u určitých metabolizujících enzymů [CYP3A5 * 3 (rs 776746), CYP2C8 * 3 (rs 11572080 a rs 10509681)] a membránových transportérů [ABCB1 2677 G>T/A (rs 2032) a SLC22A1 1222 A > G (rs 628031)] na plazmatickou hladinu a molekulární odpověď (MMR) imatinibu u pacientů s CML.

Tyto polymorfismy byly vybrány na základě jejich relevance pro farmakokinetiku imatinibu a na základě jejich frekvence u bělochů.

Cílem studie je také poskytnout pacientům s CML možnost personalizované léčby, a tím pravděpodobně zlepšit odpověď a snížit vedlejší účinky.

Pacienti a metody:

Pacienti:

Studie bude zahrnovat pacienty s dokumentovanou hematologickou, cytogenetickou a molekulární diagnózou chronické fáze CML, kteří jsou na kontinuální léčbě perorální dávkou 400 mg imatinibu denně po dobu nejméně 12 měsíců na oddělení lékařské onkologie, South Egypt Cancer Institute (SECI), Assiut. Egypt.

Kritéria pro vyloučení jsou: trvání léčby imatinibem méně než 12 měsíců, špatná compliance k léčbě a identifikace genové mutace (mutací) v kinázové doméně BCR-ABL1.

Pacienti budou rozděleni do 2 skupin podle jejich molekulární odpovědi na imatinib následovně:

Skupina I: CML pacienti s MMR Skupina II: CML pacienti bez MMR Pacienti v obou skupinách budou porovnáni z hlediska plazmatické hladiny imatinibu a vybraných genetických polymorfismů.

Metody:

Odběr krve:

Tři vzorky krve (3 ml pro každý) budou odebrány do zkumavek obsahujících EDTA venepunkcí pro měření hladiny imatinibu v plazmě, měření hladiny transkripce BCR-ABL1 a pro genotypizaci.

Měření minimální hladiny imatinibu:

Vzorky krve budou odebírány po 24 hodinách od předchozí dávky (minimum) a po minimálně 5 dnech pravidelného užívání léku, aby bylo zajištěno dosažení rovnovážného stavu. Do 1 hodiny po odběru se vzorky krve odstřeďují při 3000 otáčkách za minutu po dobu 10 minut při teplotě místnosti a až do analýzy budou skladovány při -20 °C.

Plazmatická hladina imatinibu bude měřena vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s ultrafialovou detekcí (HPLC-UV) podle metody popsané Barrattem et al.

Měření úrovně transkripce BCR-ABL1:

Celková RNA bude extrahována z leukocytů periferní krve dostupnými soupravami pro extrakci RNA. Úroveň transkripce BCR-ABL1 bude kvantifikována pomocí analýzy polymerázové řetězové reakce (PCR) v reálném čase k posouzení molekulární odpovědi na imatinib po 12 měsících léčby imatinibem.

Genotypizace:

DNA bude extrahována z leukocytů dostupnými soupravami pro extrakci DNA a bude uchovávána při -80 °C až do genotypizace.

Pro CYP3A5 * 3 (rs 776746), CYP2C8 * 3 (rs 11572080 a rs 10509681), ABCB1 2677 G>T/A (rs 2032582) a SLC22A1 1222 A > G0 bude provedena genotypizace pomocí PCR