Epidemiologische Untersuchung von COVID-19 in Laos unter Verwendung eines One-Health-Ansatzes bei Mensch und Tier (LACOVISS)

1. EINFÜHRUNG

   Dieses Projekt basiert hauptsächlich auf zwei großen Fragen, die ungelöst bleiben. Der erste ist der Ursprung des Ausbruchs und die Ereignisse, die zur Übertragung von SARS-CoV-2 auf den Menschen geführt haben. Die zweite ist die auffällige epidemiologische Situation in Laos, wo trotz ähnlicher biogeografischer und sozio-ökologischer Merkmale wie in Südwestchina nur wenige Fälle beobachtet wurden , wo die Fledermausvielfalt mit über 100 Arten ihren Höhepunkt erreicht), die mit der weiten Verbreitung von Coronaviren, insbesondere in der PDR Laos, und ihrem evolutionären und zoonotischen Potenzial in Verbindung gebracht werden, deuten darauf hin, dass (vergangene oder zukünftige) Auftauchen in Laos zu erwarten sind. Darüber hinaus wurde angesichts der massiven Bevölkerungsbewegungen zwischen Laos und China mit einer erheblichen Ausbreitung von COVID-19 von China nach Laos gerechnet. Um diese beiden Hauptfragen zu beantworten, formulieren die Forscher die folgenden Arbeitshypothesen, die in diesem Projekt behandelt werden sollen.

   Annahme 1: COVID-19 könnte sich in naher Zukunft durch die Ankunft infizierter Personen im Land massiv auf die Bevölkerung von Laos ausbreiten.

   Annahme 2: SARS-CoV-2 war bereits vor dem Auftreten des COVID-19-Ausbruchs in China in Laos im Umlauf.

   Annahme 3: SARS-CoV-2 könnte aus Wildtieren überspringen und in der Zukunft in die laotische menschliche Bevölkerung eindringen. Annahme 4: Einige genetisch eng verwandte Viren (SARS-CoV-2-ähnliche Viren) sind bereits in Laos zirkuliert.

2. ZIELE

   Das allgemeine Ziel des Projekts ist es, den natürlichen Verlauf von COVID-19 aufzuklären, indem die Zirkulation des Virus in der DVR Laos nach einem ONE-HEALTH-Ansatz vor (retrospektiver Ansatz) und nach (prospektiver Ansatz) dem ersten Auftreten des Ausbruchs untersucht wird China.

   Insbesondere werden die Ermittler den Verlauf des Ausbruchs und die Gründe für die relativ geringe Zahl von COVID-19-positiven Patienten untersuchen, die bisher im Land beobachtet wurden, obwohl sie biogeografische und sozioökologische Merkmale teilen und grenzüberschreitend mit Südwestchina sind .

   Unter dieser allgemeinen Überschrift sind die sekundären Ziele:

   In Menschen:

   Bestimmung der Verbreitung von COVID-19 innerhalb der Kohorte vor dem Auftreten der ersten positiven Fälle im Dezember 2019 in Wuhan, China Bestimmung des Fortschreitens von COVID-19 über einen Zeitraum von einem Jahr ab Projektbeginn Bewertung der SARS-CoV- 2 asymptomatische Infektionen Zur Beurteilung der vergangenen SARS-CoV-2-Zirkulation

   Bei Tieren:

   Untersuchung der Übertragung von SARS-CoV-2 auf Haus- und Haustiere

3. METHODIK

   In Menschen:

   Das Projekt wird in einer gemeindebasierten Kohorte von 1092 Haushalten durchgeführt, darunter 5400 Studienteilnehmer, die zwischen März 2015 und Februar 2019 zur Untersuchung grippeähnlicher Erkrankungen und zum Nachweis von Erregern nachverfolgt werden (LACORIS-Projekt, respiratorische Infektionskrankheiten unter den Kohorten in Vientiane Capital, Laos PDR), in der Metropolregion Vientiane in Laos PDR (Referenz 1 und interne Berichte).

   • Retrospektiver Ansatz: Bestimmung der COVID-19-Zirkulation innerhalb der Kohorte vor dem Auftreten der ersten positiven Fälle im Dezember 2019 in Wuhan, China, durch retrospektiven SARS-CoV-2-RNA-Nachweis in Proben aus einer Kohorte von 1092 Haushalten, darunter 5400 Studien Teilnehmer, Follow-up zwischen März 2015 und Februar 2019 (LACORIS-Projekt) (1 und interne Berichte).
   • Prospektiver Ansatz: Bestimmung des Fortschreitens von COVID-19 über einen Zeitraum von einem Jahr ab Projektbeginn durch SARS-CoV-2-RNA-Nachweis bei Personen, die eine grippeähnliche Erkrankung aufweisen.
   • Dazu werden die intrafamiliäre und innergemeinschaftliche Übertragungsrate und der Kontext durch SARS-CoV-2-RNA-Nachweis in Kontakten von COVID-19-positiven Fällen, die während der prospektiven Phase des Projekts entdeckt wurden, bewertet.
   • Bewertung der vergangenen SARS-CoV-2-Zirkulation durch Screening spezifischer Antikörper aus Speichelabstrichen in einer randomisierten Gruppe der Kohortenstudie.

   Bei Tieren:

   - Untersuchung der Übertragung von SARS-CoV-2 auf Haus- und Haustiere durch RNA-Nachweis bei Tieren, die mit oder in der Nähe positiver Fälle leben, die während der prospektiven Phase des Projekts entdeckt wurden.

4. STUDIENGEBIETE UND BEVÖLKERUNG

   Die Studie umfasst 1092 Haushalte, darunter 5400 Studienteilnehmer, die in 25 Dörfern innerhalb der Verwaltungsgrenzen des Großraums Vientiane leben. Ein Haushalt wurde definiert als eine Gruppe von Personen, die auf demselben Grundstück (ein oder mehrere Häuser) oder im selben Gebäude (Wohnung) leben und ihre Mahlzeiten teilen. Alle Studienmitprüfer werden vor Beginn und während der Studie weiter geschult die besonderen Aspekte des Studiums.

5. FORSCHUNGSFLUSSDIAGRAMM

5.1 Flussdiagramm des Teilnehmers mit ILI-Symptomen

Alle Familienmitglieder, die seit mehr als 6 Monaten mit SARS-CoV-2-positiven Personen leben, werden einer nicht-invasiven Untersuchung zum SARS-CoV-2-Nachweis (Nasen-, Rachen-, Abstrich-, Speichel) und einem Fragebogen unterzogen.

Teilnahme an der Studie

Informationen: Alle Teilnehmer erhalten ein schriftliches Informationsformular zur Teilnahme an der Studie. Dieses Formular enthält Informationen zu Umfang und Zweck der Studie sowie zu den Pflichten der Studienleiter und den Erwartungen der Kohortenmitglieder.

Einholung der Einwilligung: Vor Beginn der Studie wird ein Termin mit dem untersuchenden Überwachungsteam des Haushalts vereinbart, um die Einzelheiten des Projekts zu erläutern. Zu diesen Angaben gehört die Entnahme von Atemwegsabstrichen im Falle einer grippeähnlichen Erkrankung für den Patienten und seine Angehörigen. Das Team reicht das Informationsformular ein und holt die schriftliche Einverständniserklärung von jedem willigen Haushaltsmitglied ab, die zuvor von drei Personen unterschrieben wurde (Interviewer, Elternteil oder Erziehungsberechtigter, Zeuge/Familienmitglied).

Kohortenteilnahme:

Die Projektstudie erstreckt sich über einen Zeitraum von einem Jahr und beginnt, sobald die ethische Freigabe vorliegt. Haushalte werden aus Haushaltsregistern ausgewählt und gemäß der bereits bei CILM eingerichteten Datenbank durch Haus-zu-Haus-Stichproben in die Kohorte aufgenommen. Ein Haushalt ist definiert als eine Gruppe von Personen, die auf demselben Grundstück (ein oder mehrere Häuser) oder in demselben Gebäude (Wohnung) leben und sich Mahlzeiten teilen. Über ein Jahr lang wird eine aktive Fallfindung für grippeähnliche Erkrankungen (ILI) in der Kohorte durch wöchentliche Telefonanrufe (N=500) von Mitarbeitern des CILM in jedem Haushalt durchgeführt. Um die Wahrscheinlichkeit einer Erregeridentifizierung zu erhöhen, werden die Studienteilnehmer ermutigt, das Auftreten von Symptomen selbst zu melden, um eine frühzeitige Entnahme von Proben zu ermöglichen. Sobald ein Fall die ILI-WHO-Kriterien erfüllt, wird am selben Tag ein kostenloser Besuch durch das vor Ort geschulte Gesundheitspersonal (das Untersuchungsüberwachungsteam) organisiert, um die Eignungskriterien für die Krankheit zu befragen und zu überprüfen, um eine Krankheit abzuschließen Untersuchungsfragebogen, in dem Details zur Symptomatik erhoben werden.

Diagnoseergebnisse und ILI-Nachsorge:

Die Ergebnisse der COVID-19-Analyse (positiv oder negativ) werden an das NCLE (National Centre for Laboratory and Epidemiology) übermittelt.

Wenn das Ergebnis COVID19 positiv ist, wird das NCLE es an das "National Taskforce Committee for Prevention, Control and Response COVID-19 Pandemie" weiterleiten. Der COVID-19-positive Patient wird von diesem nationalen Komitee betreut und gemäß den offiziellen Verfahren weiterverfolgt.

Gemäß den Empfehlungen des Ausschusses werden bei allen Familienmitgliedern, die mit dem COVID-19-Patienten leben, Proben genommen, um nach asymptomatischen Infektionen zu suchen. In allen anderen Fällen (Nachweis eines anderen Atemwegsvirus oder negative Ergebnisse) wird das Ergebnis vor Ort schriftlich direkt an den Teilnehmer (Erwachsene oder Kinder zwischen 12 und 18 Jahren) oder an die Eltern oder Erziehungsberechtigten ( Kinder unter 12 Jahren oder Erwachsene mit psychiatrischen Störungen) durch den Interviewer. Die Teilnehmer werden zur Behandlung an Ärzte oder die örtlichen Gesundheitseinrichtungen überwiesen. Es gibt vier allgemeine Krankenhäuser in Vientiane und mehrere lokale Gesundheitseinrichtungen in jedem der 25 Dörfer, die in unsere Studie aufgenommen wurden. Wenn ein Patient an ILI erkrankt, berät ihn der Arzt unseres Teams über die zu ergreifende Behandlung, über die zu ergreifenden vorbeugenden Maßnahmen zur Vermeidung einer Kontamination anderer Familienmitglieder und leitet ihn an die nächstgelegene Gesundheitseinrichtung weiter. Außer in Ausnahmefällen wird im Projekt keine logistische (Transport) oder medizinische Unterstützung empfohlen.

Die Patienten oder ihre Familie werden 60 Tage später aufgesucht, um den allgemeinen Gesundheitszustand, einschließlich Krankenhausaufenthalt oder Tod, zu bestimmen.

5.2 Ende der Recherche

Am Ende der Studie wird jedem Haushalt ein Abschlussbericht zugestellt und die Ergebnisse vom Interviewer erläutert.

Jede Woche wird der Haushaltsvorstand telefonisch kontaktiert, um zu fragen, ob ein Mitglied seiner Familie Krankheitssymptome aufweist. Wenn 3 aufeinanderfolgende Wochen keine Nachricht von einem Teilnehmer kommt, wird ein Ermittler vor Ort gehen, um genauere Untersuchungen durchzuführen.

5.3 Fragebögen

Insgesamt umfasst die Studie zwei Arten von Fragebögen:

Ein Haushaltsfragebogen mit soziodemografischen Angaben. Volkszählungsfragen, die bei der Anmeldung gestellt werden, um eine Datenbank der teilnehmenden Dörfer für wöchentliche Hausbesuche, Krankheitsuntersuchungen und Nachuntersuchungen aufzubauen. Dieser Fragebogen wird vom Interviewer für jeden Haushalt zum Zeitpunkt der Anmeldung ausgefüllt, wenn das Informationsformular abgegeben und die Unterschrift der Einwilligungserklärung eingeholt wird.

Ein Fragebogen zur Krankheitsuntersuchung, einschließlich Einzelheiten zur ILI-Krankheit. Die gestellten Fragen liefern Informationen über die Person, die sich krank gemeldet hat, und umfassen grundlegende klinische Beobachtungen und andere Informationen, die für das Verständnis der Krankheitsursache relevant sind. Dieser Fragebogen wird vom Interviewer zum Zeitpunkt der Probenentnahme ausgefüllt.

Unter Verwendung von Standardprotokollen zu entnehmende Proben umfassen:

• Obere Atemwegsabstriche (Speichel-, Rachen- und Nasenabstriche): Die Proben werden gemäß den Empfehlungen des "National Taskforce Committee for Prevention, Control and Response COVID-19 Pandemie" auf einem Transportmedium gesammelt. Jede Probe wird von geschultem Außendienstpersonal mit sterilen Nylontupfern mit Kunststoffschäften entnommen und in das sterile Kryovial mit universellem Transportmedium (UTM) eingeführt.
• Die Proben werden zum Testen in Kühlboxen platziert und zum CILM transportiert.
• Die Patientenidentifikationsnummer (siehe unten) wird durch eine relationale Datenbank und vorgedruckte Etiketten auf dem Fragebogen und auf allen gesammelten Proben verknüpft
• Spezifische qPCR für SARS-CoV2 (die auf RdRp-, N- und E-Gene abzielen) sowie Pan-Coronavirus-Targeting auf RdRp werden an RNA durchgeführt, die aus retrospektiven und prospektiven Nasenabstrichen, Rachenabstrichen und Sputumproben extrahiert wird. Die Analysen werden am CILM (Vientiane, Laos) durchgeführt. Jede positive Probe wird sequenziert und mit Referenzsequenzen verglichen.
• Spezifische IgG-Tests werden mit Luminex- und ELISA-Technologien aus Speichelabstrichen durchgeführt.
• Nach der Prüfung werden die Proben bei -80 °C im CILM bis zur weiteren Analyse auf Anfrage für mindestens 15 Jahre gelagert. Auf Anfrage der Behörden der PDR Laos und des Personalleiters von CILM konnten die Proben nach mindestens 15 Jahren vernichtet werden.
• Auf Anfrage der koordinierenden Prüfärzte der Studie (Phimpha Paboriboune und Eric Leroy) und Zustimmung des wissenschaftlichen Ausschusses werden genetische Materialien aus positiven Proben an MIVEGEC UMR IRD 224-CNRS 5290-Université de Montpellier - IRD (911, avenue Agropolis , 34394 Montpellier France) für weitere Analysen, die nicht am CILM durchgeführt werden können, oder für die Sequenzierung des gesamten Genoms.