Hauttumor-Biomarker durch massenspektrometrische Bildgebung

1. Titel Hauttumor-Biomarker durch massenspektrometrische Bildgebung

2. Ziel 2.1 Problemdefinition Im Jahr 2018 wurden weltweit mehr als 1 Million Patienten mit nicht-melanozytärem Hautkrebs (NMSC) diagnostiziert und diese Zahl könnte aufgrund fehlender oder unvollständiger Register dieser Krebsart unterschätzt werden [1]. In der Krebsdiagnostik ist die rechtzeitige Erkennung mikroskopischer Tumoren von größter Bedeutung. Wir glauben, dass die Massenspektrometrie-Bildgebung (MSI) mikroskopische Aggregate eines häufigen Hautkrebses, eines Basalzellkarzinoms (BCC) und eines Plattenepithelkarzinoms (SCC) erfolgreich lokalisieren und ex vivo von benachbarter normaler Haut unterscheiden kann. MSI enthüllt ein verändertes chemisches Profil in der BCC- und SCC-Region (Lipidmuster) und verlässt sich nicht auf die visuelle Identifizierung histopathologischer Merkmale.

   2.2 Hypothese Wir nehmen an, dass NMSC-Zellen spezifische, endogene Biomarker (Lipidmuster) aufweisen, die sich in Abschnitten von Hautbiopsien von gesundem Hautgewebe unterscheiden. Wenn diese Hypothese zutrifft, wird es in Zukunft möglich sein, eine Echtzeit-Gewebediagnose und -behandlung von NMSC mithilfe massenspektrometrisch gesteuerter Chirurgie zu entwickeln.

   2.3 Ergebnismaße

   • Identifizierung der Massen und Verteilungen ausgewählter Lipid-Biomarker in Schnitten aus entferntem BCC- und SCC-Gewebe aus der Mohs-Chirurgie.
   • Identifizierung von Massen und Verteilungen ausgewählter Lipid-Biomarker in Schnitten von Biopsien mit aktinischen Keratosen (prämaligne Läsionen).

   2.4 Hintergrund Laut dem Hautkrebsbericht 2019 des World Cancer Research Fund lag die Inzidenz von nicht-melanozytärem Hautkrebs (NMSC) im Jahr 2018 bei 1 Million Menschen und gilt damit als die am häufigsten auftretende Krebsart weltweit [1]. Das NMSC umfasst hauptsächlich Basalzellkarzinome (BCC) und Plattenepithelkarzinome (SCC).

   In Dänemark und anderen westlichen Ländern kommt es ebenfalls häufig zu diesen Tumoren [2], und die Inzidenz in Dänemark steigt weiter an und liegt bei 15.000 pro Jahr. Der Hauptrisikofaktor für NMSC ist die Exposition gegenüber ultravioletter Strahlung (UVR). Helle Hautfarbe, helles oder rotes Haar, helle Augenfarbe und immungeschwächte Menschen sind weitere bekannte Ursachen für NMSC [1,3].

   Die dänische Bevölkerung ist überwiegend hellhäutig, geografisch mobil und äußerst sonnenhungrig, was das Risiko, an Hautkrebs zu erkranken, erhöht. Täglich erhalten ca. 44 Dänen eine NMSC-Diagnose, die entweder aus BCC oder SCC besteht, wobei 40 % in den folgenden Jahren neue Tumoren entwickeln [4]. NMSC hat eine niedrige Mortalität, weist jedoch aufgrund seiner hohen Prävalenz und Rezidivrate eine bemerkenswerte Patientenmorbidität auf [2] kostet Dänemark jährlich mehr als 19 Millionen Euro und übersteigt die Kosten für das Gesundheitsmanagement und die Gesundheitsfürsorge bei Melanomen [5]. Die Pflege von NMSC erfolgt in erster Linie durch Dermatologen, und bei der Behandlung von NMSC können mehrere Modalitäten eingesetzt werden, wie z. B. Mohs-Mikrochirurgie, Exzision, Kryotherapie und verschiedene topische Modalitäten [2].

   Die niedrigsten Rezidivraten der mikrografischen Chirurgie nach Mohs machen diese Exzisionsoperation zur ersten Wahl für die Behandlung von NMSC mit hohem Risiko [6]. Bei dieser mikroskopgeführten Operation wird Gewebe von einem ausgebildeten Pathologen herausgeschnitten, geschnitten, gefärbt und beurteilt. Der Patient wartet auf dem Operationstisch, während die Geweberänder auf Krebszellen untersucht werden, ein Befund, der eine weitere Gewebeentfernung aus dem Behandlungsbereich erforderlich macht. Dementsprechend ist die Mohs-Operation zeitaufwändig und teuer, da nur eine begrenzte Anzahl von Patienten pro Tag behandelt werden kann und hochqualifiziertes Laborpersonal erforderlich ist.

   Seit Jahrzehnten profitieren Labore von der beeindruckenden Empfindlichkeit und Spezifität der Massenspektrometrie (MS). Bei der MS handelt es sich um eine etablierte Analysetechnik, bei der Verbindungen ionisiert und nach ihrer Molekülmasse sortiert werden. Auf ähnliche Weise visualisiert die MS-Bildgebung (MSI) die räumliche Verteilung von Molekülen. Scannen ganzer Gewebeabschnitte (z.B. Haut) und der Erstellung eines Massenspektrums für jede Flächeneinheit wird eine Karte der Gewebeverteilung einer Verbindung bereitgestellt.

   MSI kann viele endogene molekulare Spezies gleichzeitig erkennen, darunter Lipide, kleine Proteine ​​sowie exogene Arzneimittel, die in winzigen Konzentrationen im analysierten Gewebe verteilt sind [8].

   Janfelt und Kollegen [10] konnten mithilfe von MSI an Phospholipiden zwischen Epidermis und Dermis unterscheiden. Wir werden diese Technik verwenden, um endogene Tumorbiomarker zu identifizieren, die in Hauttumoren vorhanden sind, in angrenzender normaler Haut jedoch nicht (oder in unterschiedlicher Intensität) vorhanden sind. Integration von MSI in das diagnostische Arsenal für NMSC und Nutzung der Technologie zur Unterscheidung spezifischer Membranlipidsignaturen von bösartigem und gutartigem Gewebe in Echtzeit.

   Das langfristige Ziel über dieses Projekt hinaus ist die Einführung der Rapid Evaporation Ionization Mass Spectrometry (REIMS), jetzt auch als iKnife [11], wenn es gelingt, Lipidmuster zu identifizieren, die zur Unterscheidung zwischen bösartiger und gesunder Haut geeignet sind. Diese Methode hat das Potenzial, durch die direkte Identifizierung chemischer Tumorsignaturen weitaus empfindlicher zu sein als die einfache Gewebeanatomie, außerdem ist sie weniger arbeitsintensiv und zeitaufwändig. Die REIMS-Technik besteht aus einem elektrochirurgischen Handstück, das mit einem Massenspektrometer verbunden ist und in der Lage ist, anhand des bei der Elektrochirurgie erzeugten aerosolisierten Gewebes eine Gewebeidentifizierung in Echtzeit durchzuführen. Die Gewebeidentifizierung erfolgt durch den automatischen Abgleich der während der Operation aufgezeichneten Massenspektren mit einer bereits vorhandenen „Referenzbibliothek“. Die Modalität liefert dem Chirurgen sofortige Informationen darüber, welche Art von Gewebe geschnitten wird, und leitet die Behandlung durch die Abgrenzung der Krebsränder mit erstaunlicher Präzision. Lipidomprofile zeigten Unterschiede zwischen histologischen Tumortypen und ermöglichten die Unterscheidung von Geweben, indem sie als Biomarker fungierten [12]. REIMS hat sich auch in anderen Bereichen als wirksames Mittel zur Bestätigung der Authentizität und Qualität von Produkten erwiesen. So wird REIMS in der Lebensmittelindustrie eingesetzt, um in <3 Sekunden und mit einer Genauigkeit von 100 % zwischen Rind- und Pferdefleisch zu unterscheiden [13].

3. Methode 3.1 Studiendesign für Patienten mit Basalzellkarzinomen und Plattenepithelkarzinomen Wenn Patienten zu einem Mohs-chirurgischen Eingriff in die Abteilung für Dermatologie des Bispebjerg-Krankenhauses überwiesen werden, werden Basalzellkarzinome oder Plattenepithelkarzinome entfernt und das Gewebe eingebettet, geschnitten und gefärbt, damit der Mohs-Chirurg beurteilen kann, ob mehr Gewebe vorhanden ist muss entfernt werden. Drei Hautabschnitte (5–10 µm dick) dieses bereits entfernten Gewebes werden in unserer Studie verwendet. Ein Abschnitt wird HE-gefärbt, sodass wir genau wissen, wo sich die interessierenden Bereiche befinden. Für die MS-Analyse werden zwei Abschnitte verwendet (MSI-Spektrum und REIMS-Spektrum).

   Derzeit führen wir in der Abteilung für Dermatologie des Bispebjerg-Krankenhauses eine Mohs-Chirurgie bei Hochrisiko-BZK durch, aber die Mohs-Chirurgie von Plattenepithelkarzinomen wird innerhalb eines Jahres aufgenommen.

   3.2 Studiendesign für Patienten mit aktinischen Keratosen Wenn Patienten zu einem Verfahren zur Behandlung mehrerer aktinischer Keratosen (Grad 1, 2 oder 3) in der Dermatologischen Abteilung des Bispebjerg-Krankenhauses überwiesen werden, werden wir je nach Bedarf eine zusätzliche Stanzbiopsie (2-4 mm) durchführen von der Größe der Läsion ab. Die Biopsie wird eingebettet und geschnitten. Wir werden 3 Hautabschnitte (5–10 µm dick) verwenden. Ein Abschnitt wird HE-gefärbt, sodass wir genau wissen, wo sich die interessierenden Bereiche befinden. Zwei Abschnitte werden für die MS-Analyse am Institut für Pharmazie der Universität Kopenhagen verwendet. Wir werden aktinische Keratosen von bis zu 100 Patienten einbeziehen.

   3.3 Gewebe-Microarray Die oben erwähnte Schnittaufteilung für MSI liefert Erkenntnisse über einen einzelnen Tumor im Vergleich zum angrenzenden normalen Gewebe. Allerdings müssen wir auch Patienten untereinander vergleichen und deshalb einen Gewebe-Microarray erstellen.

   Wir werden den Gewebe-Microarray aus dem entnommenen und eingebetteten aktinischen Keratosen/BCC/SCC-Gewebe herstellen. Ein Abschnitt wird von MSI mit dem gleichen Verfahren wie oben beschrieben analysiert und zusätzliche Abschnitte werden zur Pathologiebewertung HE-gefärbt und mit traditionellen immunhistochemischen Markern wie Ki67 und p53 versehen.

4. Statistische Berechnungen Eine multivariate statistische Analyse wird für alle Massenspektren mit Matlab oder einem ähnlichen Programm durchgeführt. Mithilfe einer linearen Diskriminanzanalyse werden spektrale Unterschiede zwischen prämalignem Gewebe, Krebsgewebe und normalem Gewebe identifiziert. Die Klassifizierungsleistung wird mit einem Kreuzvalidierungsschema aufgezeichnet, bei dem ein Patient ausgelassen wird. Die Anzahl der Proben basiert auf der Berechnung der Stichprobengröße und früheren Veröffentlichungen zu anderen Krebsarten und wird als ausreichend geschätzt, um eine Referenzbibliothek zu erstellen. Wir planen eine Studie einer kontinuierlichen Antwortvariablen aus übereinstimmenden Paaren von Studienteilnehmern. Frühere Daten deuten darauf hin, dass der Unterschied in der Reaktion übereinstimmender Paare normalverteilt mit einer Standardabweichung von 8 ist. Wenn der wahre Unterschied in der mittleren Antwort übereinstimmender Paare 3 beträgt, müssen wir 58 Probandenpaare untersuchen, um die Nullhypothese zurückweisen zu können, dass dieser Antwortunterschied mit einer Wahrscheinlichkeit (Potenz) von 0,8 Null ist. Die mit diesem Test dieser Nullhypothese verbundene Fehlerwahrscheinlichkeit vom Typ I beträgt 0,05. (Programmiert zur Berechnung der Stichprobengröße; Power and Sample Size Calculation, PS, Vanderbilt University; Version 3.1.2). Basierend auf diesen Berechnungen werden wir zwischen 60 und 100 Patienten mit BCCs, AKs und SCCs rekrutieren. Die Mindestzahl beträgt 180 Patienten und die Höchstzahl 300 Patienten.

5. Teilnehmer Insgesamt werden maximal 300 Patienten für die Teilnahme an der Studie rekrutiert. Eingeschlossen sind Männer und Frauen ab 18 Jahren, die die Einschluss- und Ausschlusskriterien erfüllen. Alle potenziellen Patienten werden aus der Abteilung für Dermatologie des Universitätskrankenhauses Bispebjerg rekrutiert.

   Interessierte Patienten werden zu einem vorläufigen Informations-Screening-Besuch eingeladen, bei dem sie umfassende mündliche Informationen über die Studie von der Hauptforscherin Catharina Lerche, dem Mohs-Chirurgen Martin Gluud oder der Projektkrankenschwester June Svendsen erhalten und schriftliche Informationen ausgehändigt werden. Das Treffen findet in einem separaten Büro statt, um eine sichere und ruhige Atmosphäre zu gewährleisten. Die Patienten werden ausdrücklich darüber informiert, dass sie bei Bedarf einen oder mehrere Gutachter zu allen Besprechungen und Interventionen mitbringen können. Eine schriftliche Einverständniserklärung wird bei der Aufnahme am Tag des chirurgischen Eingriffs eingeholt, der mindestens 24 Stunden nach dem Screening-Besuch stattfindet.

   Jeder Patient wird vom Prüfarzt beurteilt, um die Eignung für die Teilnahme an der Studie zu beurteilen. Um eine homogene Gruppe optischer Vergleiche zu gewährleisten, erfolgt die Rekrutierung nach folgenden Kriterien:

   5.1 Einschlusskriterien • Patienten über 18 Jahre.

   • Patienten mit AKs, SCCs und BCCs.

   • Einholung der schriftlichen Einverständniserklärung des Patienten.

   5.2 Ausschlusskriterien • Immunsupprimierte Patienten

6. Mögliche Risiken und Nebenwirkungen Alle Patienten werden mündlich und schriftlich über Risiken und mögliche Nebenwirkungen aufgeklärt.

   6.1 Stanzbiopsie Bei Patienten mit BCC und SCC verwenden wir nur Gewebe, das bereits mit dem Standard-Mohs-Verfahren entfernt wurde. Bei Patienten mit aktinischen Keratosen wird unter örtlicher Betäubung eine Biopsie mit 2, 3 oder 4 mm Durchmesser und 3 mm Tiefe entnommen. Jede Biopsie hinterlässt eine runde Narbe mit einem Durchmesser von 2 mm oder 4 mm, die innerhalb von 2 Wochen ansteigt. Die Injektion eines Lokalanästhetikums kann Schmerzen und ein Kribbeln/Prickeln an der Injektionsstelle verursachen. Das Risiko einer Infektion ist minimal, wir werden sie jedoch behandeln, wenn sie auftritt.

7. Biobank Eine Forschungsbiobank wird gemäß dem Ausschussgesetz §2 Nr. 1 eingerichtet. 13. Alle potenziellen Biopsien/Schnitte werden bis zur Analyse in der Abteilung für Pharmazie der Universität Kopenhagen, Universitetsparken 2, 2100 Kopenhagen Ø, in einem verschlossenen Gefrierschrank bei -80 °C in der Abteilung für Dermatologie des Universitätskrankenhauses Bispebjerg aufbewahrt. Wir können die Analyse nicht immer innerhalb von 5–7 Tagen durchführen, da die Erstellung eines MSI-Bildes bis zu 20 Stunden dauert und es zu Verzögerungen kommt, wenn wir mehrere BCC/SCC/aktinische Keratosen-Patienten an einem Tag haben. Bei der Erstellung des Gewebe-Mikroarrays entnehmen wir vor der Analyse Gewebe von 6–8 Patienten. Nach der MSI-Analyse werden die Proben vernichtet. Die Zerstörung verbleibender Teile von Biopsieblöcken und Gewebe-Microarrays-Blöcken erfolgt nicht später als 1. Januar 2025. Es wird kein Gewebe für unspezifische Forschungszwecke aufbewahrt.
8. Informationen aus Patiententagebüchern Das Gesundheitspersonal wird Informationen zur Pathologiebeschreibung der vermuteten Läsion aus dem Patiententagebuch verwenden, wenn mögliche Patienten untersucht werden, die in diese Studie einbezogen werden sollen. Nach der Unterzeichnung der Einverständniserklärung durch den Patienten werden Informationen aus dem Patiententagebuch zur Beschreibung des Tumortyps, der Lage, der Größe und der Frage, ob es sich um eine wiederkehrende Läsion handelt, verwendet.

9. Datenschutz, Informationsspeicherung und Qualitätskontrolle 9.1 Qualitätskontrolle Die Deklaration von Helsinki II wird respektiert, ebenso wie die Standards guter klinischer Forschung. Die Privatsphäre sowie die körperliche und geistige Unversehrtheit der Patienten werden gewahrt. Die Studie wird beim Ausschuss für Ethik in der Gesundheitsforschung und bei der dänischen Datenschutzbehörde registriert.

   9.2 Datenschutz und Speicherung Die Datenschutz-Grundverordnung (dänisch: Databeskyttelsesloven/Persondataforordningen) wird eingehalten. Forschung unter Verwendung der Daten der Hauptstadtregion Dänemarks gilt als öffentliche Forschung. Die Nutzung und Verbreitung der in dieser Studie gesammelten Daten wird während des Einwilligungsprozesses mit den Patienten besprochen. Das Projekt wird dem dänischen Wissenszentrum für Datenschutz-Compliance (dänisch: Videncenter for Dataanmeldelse, Region Hovedstaden) gemeldet. Es wird eine Liste der untersuchten Patienten und Patienten mit Namen, Studien-ID-Nummer und Geburtsdatum erstellt. Alle erfassten Daten werden anonymisiert und durch dänisches Recht zur Verwaltung personenbezogener Daten und das dänische Gesundheitsgesetz (dänisch: Sundhedsloven) geschützt. Die Daten werden nach Studienende in der Dermatologischen Abteilung des Bispebjerg-Krankenhauses registriert und 5 Jahre lang gespeichert.

10. Finanzielle Überlegungen Die Studie wurde von der Hauptforscherin Catharina M. Lerche konzipiert. Eine finanzielle Unterstützung durch kommerzielle Unternehmen ist nicht vorgesehen. Die Abteilung für Dermatologie des Universitätskrankenhauses Bispebjerg wird das Gehalt für die Hauptforscherin Catharina M. Lerche bereitstellen. Andere mit dem Projekt verbundene Ausgaben werden von der Dänischen Krebsgesellschaft (Knæk Cancer Midler 1,6 Mio. DKK) und der Lundbeck Foundation (10 Mio. DKK) übernommen. Die Hauptforscherin Catharina M. Lerche und die Mitarbeiter haben keine persönliche Beziehung oder wirtschaftliche Beteiligung an der Dänischen Krebsgesellschaft oder der Lundbeck-Stiftung.
11. Erstattungen Es gibt keine Erstattungen an die Patienten.

12. Informationen für Patienten Die Hauptforscherin, Catharina M. Lerche, ist dafür verantwortlich, klare mündliche und schriftliche Informationen über Ziel, Design und Risiken der Studie zu geben, wie in „Information og samtykke til deltagelse I sundhedsvidenskabelige forskningsprojekter“ des dänischen Gesundheitsministeriums ( Dänisch: Sundheds- og Ældreministeriet). In einer ungestörten Atmosphäre wird der Teilnehmer auf sein Recht auf die Anwesenheit eines/oder mehrerer Prüfer hingewiesen, auf die freiwillige Teilnahme des Teilnehmers und auf die jederzeitige Möglichkeit eines Rücktritts während der Studie. Den Patienten wird eine angemessene Bedenkzeit (mindestens 24 Stunden) eingeräumt. Die Patienten werden gebeten, eine Einverständniserklärung zu unterschreiben.

    Der Patient wird aufgefordert, das beiliegende Material zum Recht des Studienteilnehmers zu lesen. Es werden keine Studienverfahren eingeleitet, bevor die Teilnehmer die Einverständniserklärung unterzeichnet haben. Weitere Fragen der Patienten beantwortet die Ansprechpartnerin Catharina M. Lerche

13. Veröffentlichung der Ergebnisse Positive, negative und nicht schlüssige Ergebnisse werden veröffentlicht. Ziel ist die Veröffentlichung und Präsentation der Ergebnisse in einem peer-reviewten internationalen Dermatologie-Journal oder/und auf dermatologischen Konferenzen. Die geistigen Eigentumsrechte an den Ergebnissen liegen beim Universitätskrankenhaus Bispebjerg. Die Veröffentlichungen erfolgen im Einklang mit den Vancouver-Richtlinien.
14. Ethik Die Biopsien werden in der Abteilung für Dermatologie des Universitätskrankenhauses Bispebjerg entnommen. Persönliche Informationen und Proben werden gemäß dem Gesetz über personenbezogene Daten und Gesundheit behandelt. Darüber hinaus wird das Projekt mit minimalen Gesundheits- und Sicherheitsrisiken für die Teilnehmer durchgeführt.

Chirurgische Eingriffe gehören in Krankenhäusern und Kliniken auf der ganzen Welt zum Alltag. Diese Studie zu NMSC-Biomarkern und die Entwicklung einer neuen Behandlung von Hautkrebs auf Basis der Massenspektrometrie hat das Potenzial, Tumorrezidive, Morbidität und Kosten zu reduzieren. Eine Studie zu NMSC-Biomarkern und der klinischen Umsetzung von REIMS bei der Behandlung von Hautkrebs wurde noch nicht durchgeführt. Es wird davon ausgegangen, dass die potenziellen Risiken für Nebenwirkungen in dieser Studie gering sind und dass ein potenzieller Nutzen aus einer Verbesserung des Tumorrezidivs, der Morbidität, der Kosten sowie der geringeren Arbeitsintensität und des Zeitaufwands besteht. Das Potenzial evidenzbasierter zukünftiger Gewinne und die Zukunftsperspektiven, die diese Studie bieten könnte, sollten gegen die Beschwerden der Teilnehmer während der Biopsie und den zusätzlichen Besuch im Bispebjerg-Krankenhaus abgewogen werden. Die dänischen Gesetze zu Patientenrechten und Entschädigung werden befolgt.

15. Versicherung Bispebjerg Krankenhaus

16. Referenzen

1. Diät, Ernährung, körperliche Aktivität und Hautkrebs. 2018.
2. Lamberg, A. L. et al. Die dänische Dermatologie-Datenbank für nichtmelanozytären Hautkrebs. Klin. Epidemiol. 8, 633-636 (2016).
3. Jensen, A. et al. Alkoholkonsum kann das Risiko für nicht-melanozytären Hautkrebs verändern: Ergebnisse einer großen dänischen prospektiven Kohortenstudie. J. Invest. Dermatol. 132, 2718-2726 (2012).
4. Kyrgidis, A., Tzellos, T. G., Vahtsevanos, K. & Triaridis, S. Neue Konzepte für Basalzellkarzinome. Demografische, klinische, histologische Risikofaktoren und Biomarker. Eine systematische Überprüfung der Evidenz hinsichtlich des Risikos für die Tumorentwicklung, der Anfälligkeit für eine zweite Primärtumorerkrankung und eines erneuten Auftretens. J. Surg. Res. 159, 545-556 (2010).
5. Bentzen, J. et al. Krankheitskosten für Melanom- und Nicht-Melanom-Hautkrebs in Dänemark. EUR. J. Krebs Vorher. 22, 569-576 (2013).
6. Smeets, N.W.J. et al. Mikrographische Chirurgie nach Mohs zur Behandlung von Basalzellkarzinomen im Gesicht – Ergebnisse einer retrospektiven Studie und Literaturübersicht. Br. J. Dermatol. 151, 141-147 (2004).

8. Nilsson, A. et al. Massenspektrometrische Bildgebung in der Arzneimittelentwicklung. Anal. Chem. 87, 1437-1455 (2015).

10. Sørensen, I. S. et al. Kombination von MALDI-MSI und Kassettendosierung zur Bewertung der Arzneimittelverteilung in menschlichen Hautexplantaten. Anal. Bioanal. Chem. 409, 4993-5005 (2017).

11. Balog, J. et al. Identifizierung biologischer Gewebe durch schnelle Verdunstungsionisations-Massenspektrometrie. Anal. Chem. 82, 7343-7350 (2010).

12. Balog, J. et al. Intraoperative Gewebeidentifizierung mittels schneller Verdunstungs-Ionisations-Massenspektrometrie. Wissenschaft. Übers. Med. 5, (2013).

13. Balog, J. et al. Identifizierung der Herkunftsarten von Fleischprodukten mittels Rapid Evaporative Ionization Mass Spectrometry. J. Agrar. Lebensmittelchem. 64, 4793-4800 (2016).