HRME w badaniach przesiewowych zmian prekursorowych raka szyjki macicy w Brazylii (UH3 – Brazylia) (UH3)

PROJEKT BADANIA:

Jest to eksperymentalne badanie metodologiczne z użyciem jednoramiennego, nieosłoniętego, unicentrycznego, międzynarodowego urządzenia diagnostycznego.

WYTYCZNE:

1780 kobiet z nieprawidłowym badaniem cytologicznym (ASCUS+) lub pozytywnym testem HPV wysokiego ryzyka w szyjce macicy, przeprowadzonym w programie badań przesiewowych Barretos Cancer Hospital (HCB, Barretos, Brazylia), zostanie zrekrutowanych do Mobilnych Jednostek Prewencji lub Jednostek Stałych, które zostały skierowanie na badania diagnostyczne z kolposkopią. Podczas badania kolposkopowego aparat HRME posłuży do sprawdzenia obecności zmian prekursorowych w szyjce macicy.

WERYFIKACJA WSTĘPNA:

Ponieważ badania te mogą obejmować biopsję szyjki macicy u kobiet w okresie płodności, ze względów bezpieczeństwa zostanie zweryfikowana możliwość zajścia w ciążę w tej grupie kobiet, gdyż biopsja szyjki macicy kobiety ciężarnej zwiększa ryzyko poronienia. Weryfikacja ta zostanie przeprowadzona na podstawie wywiadu klinicznego (opóźnienie miesiączki, objawy sugerujące ciążę, metody antykoncepcji itp.), a także na podstawie badań jakościowych ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej w moczu. Ten test jest również znany jako „szybki test ciążowy” lub „test apteczny”, z obszerną listą produktów sprzedawanych w Brazylii i autoryzowanych przez „Agencia Nacional de Vigilancia Sanitária” (ANVISA, Brazylijska Agencja Nadzoru Zdrowia). Zasada testu obejmuje jednoetapową metodę immunochromatograficzną w celu wykrycia hormonu. Reakcja zachodzi na pasku odczynników, na którym osadza się niewielka ilość moczu. Wynik testu jest dostarczany w ciągu około 2 minut. Kobiety w ciąży (lub z podejrzeniem ciąży) nie będą objęte badaniem, lecz zostaną poddane badaniu diagnostycznemu zgodnie z protokołem zakładowym dla kobiet w ciąży ze zmianami w szyjce macicy w HCB. Kobiety te otrzymają orientację medyczną i zostaną skierowane do specjalistycznej służby położniczej.

POBIERANIE CYTOLOGII SZYJKI SZYJKI:

Przed wykonaniem badań diagnostycznych lekarz pobierze nową cytologię szyjki macicy (Papanicolaou), która jest rutynową czynnością Oddziału Kolposkopii dla każdej kobiety, u której wynik badania cytologicznego jest zmieniony lub pozytywny na HPV. Próbki te zostaną zakonserwowane w podłożu konserwującym na bazie etanolu (SurePath™ Preservative Fluid, Becton & Dickinson, USA) i zostaną wysłane do Departamentu Patologii HCB, gdzie zostaną poddane automatycznej obróbce w celu przygotowania szkiełek cytologicznych.

BADANIA DIAGNOSTYCZNE:

VIA zostanie przeprowadzona przy użyciu 3-5% kwasu octowego, nałożonego na szyjkę macicy oraz na wszelkie zaobserwowane nieprawidłowe zmiany. Następnie zostanie podany roztwór jodu i zostanie wykonana kolposkopia. Należy wyjaśnić, że aplikacja kwasu octowego i jodu jest wykonywana rutynowo podczas standardowego badania kolposkopowego.

Następnie na powierzchnię szyjki macicy zostanie nałożony Proflavine (0,01%). HRME wykona zdjęcia ze wszystkich obszarów uznanych za nieprawidłowe przez VIA i/lub kolposkopię. Ponadto wszystkie cztery ćwiartki zostaną przebadane za pomocą HRME, aby upewnić się, że zaobserwowano również wszelkie zmiany inne niż acetobiałe. Osoba odpowiedzialna za kolposkopię weźmie pod uwagę Twoją opinię na temat zmiany i obrazu HRME w każdym obszarze (normalny, łagodny, przedrakowy o niskim stopniu złośliwości, przedrakowy o wysokim stopniu złośliwości lub rak). Pełna procedura obrazowania HRME doda 5-10 minut do standardowego badania kolposkopowego. Obserwacje związane z VIA, kolposkopią i HRME będą rejestrowane według kwadrantu. Wszelkie nieprawidłowe obszary wykryte za pomocą VIA i / lub kolposkopii zostaną poddane biopsji. Jeśli nie zaobserwowano nieprawidłowego obszaru, ale kobieta ma zmieniony wynik testu cytologicznego lub pozytywny wynik testu HPV, mikrobiopsja szyjki macicy zostanie pobrana z pozornie prawidłowego obszaru, wykrytego przez obrazowanie HRME tego obszaru. Do wszystkich biopsji szyjki macicy zostaną użyte specjalne pęsety, powodujące minimalny uraz tkanki (mikrobiopsja) i zmniejszające dyskomfort uczestnika. Te pęsety różnią się od tych powszechnie stosowanych w badaniach kolposkopowych, które zwykle wykonują biopsje na dużych obszarach i powodują większy dyskomfort u kobiet.

Dwóch doświadczonych patologów HCB, ignorując wszystkie wyniki badań, dokona przeglądu histologicznego i sklasyfikuje obszary jako prawidłowe, śródnabłonkową neoplazję szyjki macicy stopnia 1 (CIN 1), CIN 2, CIN 3, gruczolakoraka in situ (AIS) lub raka zgodnie ze standardowymi kryteriami. Sprzeczne wyniki zostaną rozwiązane w drodze konsensusu wśród patologów.

BADANIE PRZESIEWOWE I GENOTYPOWANIE WYSOKIEGO RYZYKA HPV:

Badanie przesiewowe w kierunku HPV wysokiego ryzyka zostanie przeprowadzone na porcjach próbek cytologicznych szyjki macicy (SurePath™) pobranych tuż przed kolposkopią u kobiet, które nie zostały jeszcze poddane temu badaniu. Test HPV zostanie wykonany na urządzeniu Cobas X480™ (Roche Molecular Systems, USA), które jest dostępne w parku technologicznym Molecular Oncology Research Center of Barretos Cancer Hospital – Pio XII Institution. Protokół testu zostanie wykonany zgodnie z opisem producenta.

System COBAS to zautomatyzowane urządzenie do amplifikacji (za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (PCR)) do wykrywania 14 typów HPV wysokiego ryzyka (16, 18 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68) i może przetwarzać do 94 próbek jednocześnie. Testy, które wykryły wirusa HPV wysokiego ryzyka innego niż 16 i inny niż 18, zostaną poddane analizie uzupełniającej w celu identyfikacji genotypu (genotypów) przy użyciu techniki macierzy liniowej, ponieważ system COBAS nie zapewnia genotypowania tych HPV wysokiego ryzyka. W tym celu zostanie wykorzystany zestaw do genotypowania z liniową macierzą HPV (CE-IVD) dla zestawu do genotypowania HPV (Roche Molecular Systems, USA).

ANALIZA DANYCH:

Pierwszorzędowym punktem końcowym jest częstość diagnoz CIN2+ i CIN3+. Czułość i specyficzność diagnostyczna VIA, kolposkopii i HRME w oparciu o każdą zmianę chorobową i każdego pacjenta przy użyciu diagnozy histologicznej jako złotego standardu zostaną obliczone przy założeniu, że zmiany zdiagnozowane jako CIN2 + lub CIN3 + są pozytywne. Czułość i swoistość VIA i kolposkopii również zostaną obliczone jako metoda porównawcza.

Opis każdego przypadku zostanie sporządzony przy użyciu statystyk opisowych. Zmienne kategorialne zostaną porównane za pomocą testu chi-kwadrat lub dokładnego testu Fishera, w zależności od oczekiwanych wartości w tablicach kontyngencji. Do porównania zmiennych numerycznych zostaną użyte testy t lub test Manna-Whitneya w zależności od przestrzegania normalności (do weryfikacji testem Kołmogorowa-Smirnowa).

PRZYKŁADOWE OBLICZANIE WIELKOŚCI:

Obliczenia próby oparto na informacjach z innych badań tej samej grupy (w tym danych jeszcze nie opublikowanych). Przyjęto następujące przesłanki: czułość i swoistość HRME dla rozpoznania CIN2+ (odpowiednio 93% i 48% na biopsję) oraz rozpowszechnienie CIN2+ w poradni kolposkopowej HCB (od 20 do 30%). Biorąc pod uwagę częstość występowania choroby na poziomie 25%, szacuje się, że konieczne będzie włączenie 1424 kobiet (625 przypadków do obliczenia czułości i 799 przypadków do obliczenia specyficzności), aby osiągnąć oczekiwane wskaźniki czułości i specyficzności przy maksymalnym marginesie błędu wynoszącym 4 % dla 95% przedziału ufności. Biorąc pod uwagę szacowaną utratę 10-15% (niezgłoszenie się na badanie kolposkopowe i HRME), skorygowana ocena próby wyniesie od 1566 do 1637 kobiet. Dlatego badanie ma objąć 1600 kobiet z nieprawidłowym wynikiem cytologii szyjki macicy lub dodatnim wynikiem testu HPV. Dodatkowo do badania zostanie zaproszona grupa kobiet bez zmian w cytologii szyjki macicy i badaniu HPV w celu sprawdzenia błędu weryfikacyjnego. Ten błąd występuje, gdy tylko dodatnie przypadki w skriningu są wybierane do wykonania uzupełniających badań diagnostycznych, przeceniając czułość i niedoceniając specyficzności. Zaleca się, aby odsetek przypadków negatywnych był weryfikowany zgodnie ze standardowym badaniem złota. W związku z tym 10% badanej populacji będzie składać się z przypadków negatywnych zarówno w cytologii szyjki macicy, jak i teście HPV, co odpowiada prawie 180 przypadkom. W związku z tym ostateczne oszacowanie próby będzie obejmowało 1780 kobiet, z których 1600 kobiet będzie miało wyniki badań przesiewowych (cytologia zmieniona lub pozytywny test HPV) zgłoszone jako pozytywne, a 180 będzie miało wyniki badań przesiewowych zgłoszone jako ujemne (negatywny wynik cytologii i testu HPV).

HARMONOGRAM STUDIÓW:

Nauka potrwa 3 lata.