HRME nello screening delle lesioni precursori del cancro cervicale in Brasile (UH3 - Brasile) (UH3)

PROGETTAZIONE DI STUDIO:

Si tratta di uno studio metodologico sperimentale con un dispositivo diagnostico internazionale a braccio singolo, non mascherato, unicentrico.

LINEAMENTI:

Saranno reclutate 1.780 donne con Pap test anormali (ASCUS+) o test HPV ad alto rischio positivo nella cervice eseguito nel programma di screening del Barretos Cancer Hospital (HCB, Barretos, Brasile), presso Unità mobili di prevenzione o Unità fisse, che sono state inviata per indagine diagnostica con colposcopia. Durante l'esame colposcopico, il dispositivo HRME verrà utilizzato per verificare la presenza di lesioni precursori nella cervice.

VERIFICA PRE-COLLAUDO:

Poiché questa ricerca può includere la biopsia cervicale nelle donne con fertilità, per motivi di sicurezza, verrà verificata la possibilità di gravidanza in questo gruppo di donne, poiché la biopsia eseguita nella cervice della donna incinta aumenta il rischio di aborto. Questa verifica sarà effettuata mediante la storia clinica (ritardo mestruale, segni che suggeriscono una gravidanza, metodi contraccettivi, ecc.) e anche mediante ricerca qualitativa sulla gonadotropina corionica umana nelle urine. Questo test è noto anche come "test di gravidanza rapido" o "test di farmacia", con un ampio elenco di prodotti venduti in Brasile e autorizzati da "Agencia Nacional de Vigilancia Sanitária" (ANVISA, Agenzia brasiliana di sorveglianza sanitaria). Il principio del test prevede un metodo immunocromatografico in un'unica fase per rilevare l'ormone. La reazione avviene su una striscia reattiva, dove si deposita una piccola quantità di urina. Il risultato del test viene fornito in circa 2 minuti. Le donne in gravidanza (o sospetta gravidanza) non saranno incluse nello studio, ma saranno sottoposte ad indagine diagnostica secondo il protocollo istituzionale per le donne in gravidanza con alterazioni del collo dell'utero all'HCB. Queste donne riceveranno un orientamento medico e saranno indirizzate a un servizio ostetrico specializzato.

RACCOLTA DI CITOLOGIA CERVICALE:

Prima dell'esecuzione degli esami diagnostici, il medico preleverà un nuovo esame citologico cervicale (Papanicolaou), che rientra nella routine del Dipartimento di Colposcopia per ogni donna che presenti un Pap test alterato o un test HPV positivo. Questi campioni saranno conservati in un mezzo di conservazione a base di etanolo (SurePath™ Preservative Fluid, Becton & Dickinson, USA) e saranno inviati al Dipartimento di Patologia dell'HCB dove subiranno un trattamento automatizzato per la preparazione dei vetrini citologici.

ESAMI DIAGNOSTICI:

La VIA verrà eseguita utilizzando acido acetico al 3-5%, applicato sulla cervice e su eventuali lesioni anomale osservate. Quindi verrà applicata la soluzione di iodio e verrà eseguita la colposcopia. È necessario chiarire che l'applicazione di acido acetico e iodio viene eseguita di routine durante un normale esame di colposcopia.

Quindi, Proflavine (0,01%) verrà applicato sulla superficie della cervice. HRME catturerà le immagini da tutte le aree considerate anormali da VIA e/o colposcopia. Inoltre, tutti e quattro i quadranti saranno sondati con HRME per garantire che vengano osservate anche eventuali lesioni non acetobianco. La persona responsabile della colposcopia prenderà nota della tua opinione sulla lesione e sull'immagine HRME in ciascuna area (normale, benigna, precancerosa di basso grado, precancerosa di alto grado o cancro). La procedura di imaging HRME completa aggiungerà 5-10 minuti all'esame di colposcopia standard. Le osservazioni relative a VIA, colposcopia e HRME saranno registrate per quadrante. Eventuali aree anormali rilevate da VIA e/o colposcopia saranno sottoposte a biopsia. Se non si osserva alcuna area anormale, ma la donna ha un test citologico alterato o un test HPV positivo, verrà eseguita una microbiopsia cervicale da un'area apparentemente normale catturata dall'imaging HRME di quell'area. Per tutte le biopsie cervicali verranno utilizzate pinzette speciali, causando traumi tissutali minimi (microbiopsia) e riducendo il disagio del partecipante. Queste pinzette sono diverse da quelle comunemente utilizzate nei test di colposcopia, che di solito eseguono biopsie su aree estese e portano più disagio alle donne.

Due esperti patologi dell'HCB, ignorando tutti i risultati dello studio, esamineranno l'istologia e classificheranno le aree come normali, neoplasia intraepiteliale cervicale di grado 1 (CIN 1), CIN 2, CIN 3, adenocarcinoma in situ (AIS) o cancro secondo criteri standardizzati. I risultati contrastanti saranno risolti mediante revisione del consenso tra i patologi.

SCREENING E GENOTIPIZZAZIONE DELL'HPV AD ALTO RISCHIO:

Lo screening dell'HPV ad alto rischio verrà eseguito su aliquote di campioni di citologia cervicale (SurePath™) raccolti appena prima della colposcopia in donne che non sono state ancora sottoposte a questo test. Il test HPV verrà eseguito su un dispositivo Cobas X480 ™ (Roche Molecular Systems, USA), disponibile presso il parco tecnologico del Molecular Oncology Research Center del Barretos Cancer Hospital - Pio XII Institution. Il protocollo di prova verrà eseguito come descritto dal produttore.

Il sistema COBAS è un dispositivo di amplificazione automatizzato (mediante reazione a catena della polimerasi in tempo reale (PCR)) per il rilevamento di 14 tipi di HPV ad alto rischio (16, 18 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 e 68) e può elaborare fino a 94 campioni simultanei. I test che hanno rilevato HPV non-16 e non-18 ad alto rischio saranno sottoposti ad analisi complementari per identificare il/i genotipo/i utilizzando la tecnica dell'array lineare, poiché il sistema COBAS non fornisce la genotipizzazione di questi HPV ad alto rischio. A tale scopo verrà utilizzato il kit di genotipizzazione HPV lineare (CE-IVD) per il kit di genotipizzazione HPV (Roche Molecular Systems, USA).

ANALISI DEI DATI:

L'endpoint primario è il tasso di diagnosi di CIN2+ e CIN3+. La sensibilità e la specificità diagnostica di VIA, colposcopia e HRME basate su ciascuna lesione e ciascun paziente che utilizza la diagnosi istologica come gold standard saranno calcolate assumendo che le lesioni diagnosticate come CIN2 + o CIN3 + siano positive. La sensibilità e la specificità della VIA e della colposcopia saranno calcolate anche come metodo di confronto.

Verrà effettuata una descrizione caso per caso utilizzando statistiche descrittive. Le variabili categoriali saranno confrontate mediante il test chi-quadro o il test esatto di Fisher, a seconda dei valori attesi nelle tabelle di contingenza. Per confrontare le variabili numeriche si utilizzeranno i t-test o il test di Mann-Whitney a seconda dell'aderenza alla normalità (da verificare con il test di Kolmogorov-Smirnov).

CALCOLO DELLA DIMENSIONE DEL CAMPIONE:

Il calcolo del campione si è basato su informazioni provenienti da altri studi dello stesso gruppo (inclusi dati non ancora pubblicati). Sono state prese le seguenti premesse: sensibilità e specificità HRME per la diagnosi di CIN2+ (93% e 48%, rispettivamente, per area bioptica) e prevalenza di CIN2+ nella clinica di colposcopia di HCB (che varia dal 20 al 30%). Considerando una prevalenza di malattia del 25%, si stima che sarà necessario includere 1.424 donne (625 casi per il calcolo della sensibilità e 799 casi per il calcolo della specificità) per raggiungere i tassi di sensibilità e specificità attesi con un margine di errore massimo di 4 % per un intervallo di confidenza del 95%. Considerando una perdita stimata del 10-15% (mancate visite di colposcopia e HRME), la stima corretta del campione andrà da 1.566 a 1.637 donne. Pertanto, lo studio intende includere 1.600 donne con citologia cervicale anormale o test HPV positivo. Inoltre, un gruppo di donne senza cambiamenti nella citologia cervicale e nel test HPV sarà invitato a partecipare alla ricerca per verificare il bias di verifica. Questo bias si verifica quando solo i casi positivi nello screening vengono selezionati per eseguire esami diagnostici complementari, sovrastimando la sensibilità e sottovalutando la specificità. Si raccomanda di verificare una percentuale di casi negativi secondo l'esame dell'oro standard. Pertanto, il 10% della popolazione in studio sarà costituito da casi negativi sia alla citologia cervicale che al test HPV, che corrisponde a quasi 180 casi. Pertanto, la stima finale del campione sarà di 1.780 donne, di cui 1.600 donne avranno risultati di screening (citologia alterata o test HPV positivo) riportati come positivi e 180 avranno risultati di screening riportati come negativi (citologia e test HPV negativi).

ORARIO DI STUDIO:

Lo studio durerà 3 anni.